免疫墨点法.pptVIP

南方點墨法 1.檢測基因組內特定DNA序列 2.方法是自DNA自細胞中萃取出來，將之切成片段後，以膠體電泳將各片段分離、失活後再沾到NC paper(硝基纖維紙)濾片上，在適合接附的條件下，與具有放射性的探針一起反應，再以自動放射性顯影法來偵測探針與RNA是否有形成配對情形 3.單股DNA或RNA的雜交作用：在低溫、高鹽 北方點墨法 1.檢測RNA特定序列的技術 2.北方點墨法的實驗方法與南方點墨法類似，唯一不同在於北方點墨法是以探針來偵測RNA分子內是否含某特定序列 3.方法 (1)將細胞內之total RNA萃取出來，利用膠體電泳分離後，將之轉移至硝基纖維紙上 (2)將結合在濾紙上的RNA與有標定的探針進行雜合作用，若樣品RNA中含有與探針互補之序列，則探針會與結合 西方點墨法 1.鑑定蛋白質內是否含特定序列 2.所使用的探針為有標定特殊物質的抗體，因為抗體可專一性地與抗原分子結合 3.程序 (1)利用高熱使蛋白質分子變性 (2)利用膠體電泳將蛋白質依其個別的分子量分離開來 (3)分開的蛋白質至硝基纖維紙上 (4)將鍵結有蛋白質的硝基纖維紙與含有標定特殊物質的抗體溶液作用 (5)此Ab可辨識並鍵結至特殊蛋白直上(探針：標定特殊物質的Ab) (6)將可辨識前述特定抗體的二級抗體與之作用，及可鑑定出有含特定胺基酸的蛋白質 墨點法簡介 Southern Blotting North