第七章 器官和组织培养幻灯片.pptVIP

第七章器官和组织培养 内容提要 概念：器官培养和组织培养 茎尖培养 花药和花粉培养 5、影响发育方向的因素 外植体大小 培养条件 培养基生长调节剂种类和浓度 * 是指植物某一器官的全部或部分或器官原基的培养，包括茎段、茎尖、球茎、叶片、子叶、花序、花瓣、子房、花药、花托、果实、种子等。 此处指形成层组织、分生组织、表皮组织、薄壁组织和各种器官 组织以及愈伤组织的培养。 器官培养（Organ culture ） 组织培养（Tissue culture） 一、茎尖培养 1、类型 小茎尖： 大茎尖： 材料体积小，不带叶原基的培养难，成苗所需时间长，体积大的则易于成功。 2、作用 无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究 10-100?m的茎尖分生组织（脱毒） 几十mm茎尖或更大的芽（快繁） 3、建立无菌材料及培养 健康植株上选健壮的枝梢 去叶片用自来水冲洗 再生 培养 MS培养基 75%酒精1分钟 次氯酸钠5-10分钟 0.1%升汞 4、茎尖培养的发育方向 腋芽萌发 脱分化后产生胚状体 脱分化后直接产生不定器官 脱分化后形成愈伤组织 离体繁殖 建立悬浮系或分化胚状体及不定芽 微形外植体或分生组织易产生愈伤组织 细胞分裂素和生长素的配比是关键 二、花药培养和花粉培养 1、意义 诱导形成单倍体，快速获得纯系，缩短育种周期； 有利于筛选隐性突变体，提高选择效率。 2、花药培养 1964年GuhaMaheshwari南洋金花花药培养发育成胚； 1967年BourginNitsch花药培养获得烟草植株； 2-1、花药材料的选取 选材关键在于选取花粉处于合适发育期的花药，离体培养后才能启动花粉发育。实践表明，从减数分裂期至双核期的花药，均有可能诱导离体孤雌发育。 大多数园艺植物的花药培养，成功率最高的时期为单核期，或单核中晚期。 2-2、步骤 选幼年树花蕾 取下花蕾 3-5度低温冷处理3-10天 取花药镜检 消毒接种培养 再生 3、花粉培养 50年代开始裸子植物花粉培养，获得愈伤组织； 50、60年代被子植物花粉培养失败； 1974年Nitsch等次曼陀罗和烟草花粉获得植株 3-1、花粉培养的优点 从少量花粉获得大量花粉植株； 避免花药壁产生的体细胞愈伤组织干扰，直接观察小孢子发育过程； 3-2、花粉培养 选幼年树花蕾 取下花蕾（镜检） 预培养数天 取花药 接种 分离 花粉 药壁向花粉提供营养物质； 通过药壁吸收、贮存和转化培养基中的外源物质 低温预处理 消毒 过滤离心 再生 4、影响花药（粉）培养的因素 基因型差异 花药（花粉）的生理状态 花粉发育期 甜椒、天竺葵 四分体期、小孢子早期、中期和晚期（单核靠边期）、有丝分裂期和双核花粉期 培养前低温预处理 培养基的影响 3-5?C3-10天，提高小孢子反应能力：曼陀罗、天仙子、柑桔 花药培养采用最多的培养基为MS。我国科学工作者研制的N6和马铃薯培养基； 液体悬浮培养比固体培养基好； 细胞分裂素有利于花粉胚形成； 早期要求高蔗糖浓度：5-10% *