CELL绪论优秀讲义.pptVIP

细胞培养技术 主讲人：李华玮 1、掌握细胞培养的概念，明确细胞培养、组织 培养、器官培养的联系和区别； 2、了解细胞培养的的发展史，掌握细胞培养发 展过程中的重大事件与重要人物； 3、了解细胞培养的常用术语和缩写词； 4、了解细胞培养在实际生产中的应用，认识学 习细胞培养技术的重要意义； 5、明确细胞培养技术的课程特点及学习要求。 本次课程主要内容： 一、有关细胞培养的基本概念 1、细胞培养（cell culture）：细胞（包括单个细胞）在体外条件下的生长，称为细胞培养. 在实验室的口语中，人们常把它扩展为组织培养或器官培养。 2、组织培养 （tissue culture）: 指从体内取出细胞和组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定条件下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 细胞的单一化现象，二者无区别！ 3、器官培养（organ culture）: 指应用和组织培养相似条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。 以上三个层次的培养，统称为体外培养（in vitro）. 优点：1、研究对象是活细胞； 2、研究条件可以人为控制； 3、研究的细胞种类十分广泛； 4、研究内容便于观察、检测、记录； 5、研究和应用范围比较广泛（病毒学、 生物制药、临床医学、基因工程等）； 6、研究费用比较经济； 缺点：1、培养细胞会发生改变 2、对人员、设备等要求较高 细胞培养技术：就是选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术. 动物细胞培养技术：从动物体内取出细胞或者组织，分散成单个细胞，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，让其在体外的培养瓶或培养基上继续生长和增殖的技术 。 原代培养：也叫初代培养，指直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。 传代培养：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 三、组织培养的诞生和发展简史 萌芽实验： 1885年，德国人W Roux把鸡胚髓板在温热的盐水中维持其存活了10天。 1887年，Arnold把白细胞收集在盛有盐水的小碟子里，观察到白细胞的运动，并存活了一段时间。 实验缺陷：实验难以重复，不能断定观察到的是真正存活的健康组织或细胞。 1907年，美国胚胎学家Harrison，把蛙胚神经管区的一片组织植入蛙的淋巴凝块中，组织不仅存活几个星期，而且从培养的细胞中长出轴突。 改进实验——推动了细胞培养学科的发展 1910年，Burrows用鸡血浆作为鸡胚组织的支持和营养物质。事实证明它比淋巴要好得多，能使神经组织、心脏组织及皮肤生长良好。 Burrows与同事Alexis Carrel合作成功地培养了成年狗、猫、小鼠、豚鼠，以及恶性组织的外植物。 Burrows和Carrel还证明，若把胚胎提取液（鸡胚匀浆的组织“汁”）与血浆混合使用，培养物可存活与生长得更好一些。 Carrel的巨大贡献——细胞的传代 1.把无菌技术方面的知识引入到细胞培养中； 2.发明设计了卡氏培养瓶（Carrel flask)； 卡氏瓶培养组织块流程 卡式培养瓶的优点： （1）可根据需要随时更换培养液，既有利于组织不断生长，又可以运用不同种类的营养液培养不同的细胞； （2）避免了培养过程中的偶然性污染，极大地推动了当时组织培养研究。 　　　在没有抗生素的情况下， Carrel使鸡胚心脏细胞维持生存34年，先后传代3400多次；为细胞的传代培养奠定了基础。 培养基改进的研究 两位美国科学家W.H.Lewis 和 M.R.Lewis，他们最先试图用已知成分的合成培养基取代不能正确确定其成分的天然培养基（血浆及胚胎提取液）。 1955年，Eagle等人采用一种成分确定的培养基，在添加血清的基础上，成功替代了当时普遍采用的生物体液进行细胞培养方法。 由于天然培养基从动物组织或体液来，虽然环境与体内接近，但成分复杂，个体差异大，可能会影响实验的重复性；模拟体内环境，合成配方恒定的理想培养基，是人们一直在进行的研究…… 细胞培养技术的快速发展阶段 20世纪40年代抗生素的发展、无菌技术的成熟，为动物细胞规模化的培养奠定了基础。 1962 年