第二章- 基因克隆载体-9.9.ppt

二、基因克隆载体 质粒空间构型与电泳速率： 质粒的分类 接合型质粒 质粒的改造与构建： T4噬菌体 M13噬菌体 M13的生活周期 Cosmid克隆的过程 1）双链质粒复制模式 2）单链噬菌体滚环复制模式 3）噬菌粒载体的包装 高效复制的噬菌粒单链DNA被包装成噬菌体颗粒，被挤出宿主细胞外。 表示M13辅助噬菌体DNA 空载体?-DNA产生蓝色透明斑； 颜色反应类标记：lacZ lacZ基因编码?-半乳糖苷酶，在IPTG诱导下，能催化无色底物X-gal生成蓝色化合物。 当外源基因插入lacZ中，基因灭活，不能生成蓝色化合物。 4、构建琥珀型突变体 是指CAG(Gln)向UAG(stop)的突变。 琥珀型突变(sup)： E.coli的某些菌株含特异性校正基因，其编码产物--校正tRNA能专一性纠正这一突变。 基因工程实验中使用的受体是具有琥珀型突变体校正功能的菌株。 将野生型?-DNA上D和E两个头部包装蛋白的基因中的CAG密码子突变成UAG。 当这种?-DNA进入一般E.coli后，不能合成有活性的头部蛋白，也就不能被包装和裂解细菌，从而阻止有害重组体的生物污染及扩散。