Protein-2-ok.ppt

氨基酸与 蛋白质一级结构 目 录 Ion-exchange chromatography Size-exclusion chromatography 聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE 常用于蛋白质纯度和分子量的测定 目 录 蛋白质的一级结构 1．定义： 蛋白质的一级结构是指蛋白质多肽链中氨基酸的排列顺序(sequence),一级结构的主要连接键是肽键。 二. 蛋白质一级结构的测定 蛋白质氨基酸顺序的测定是蛋白质化学研究的基础。自从1953年F.Sanger测定了胰岛素的一级结构以来,现在已经有上千种不同蛋白质的一级结构被测定。 羧肽酶是一种肽链外切酶,它能从多肽链的C-端逐个的水解。 目前常用的羧肽酶有A,B,C三种；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。 羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键；C能作用于C-末端任何AA残基。 应用过甲酸氧化法或巯基还原法(保护)拆分多肽链间的二硫键,并把-SH修饰以防止二硫键的重新生成。 用酸或碱将蛋白或多肽水解，水解产物 用离子交换层析进行定量分析 现多用HPLC、氨基酸分析仪 多肽链断裂成多个肽段,可采用两种或多种不同的断裂方法将多肽样品断裂成两套或多套肽段或肽碎片,并用色谱、HPLC等方法将其分离开来。 肽段重叠法: 利用两套或多套肽段的氨基酸顺序彼此间的 交错重叠,拼凑出整条多肽链的氨基酸顺序 蛋白质结构的主要层次 稳定蛋白质的作用力 共价键 蛋白质分子中的共价键:肽键、二硫键。是生物大分子分子之间最强的作用力 二硫键对三维结构的形成起重要的作用。 维持蛋白质分子构象的作用力a.盐键 b.氢键 c.疏水键 d.范得华力 e.二硫键 1、氢键 氢键是由两个负电性原子对氢原子的静电引力所形成,氢键的键能比共价键弱,比范德华力强 氢键产生于主链上羰基氧和酰胺氢之间,也可以主链与侧链,侧链与侧链,主链或侧链与介质之间的氢键。 2、 范德华力 一种普遍存在的作用力,是一个原子的原子核吸引另一个原子外围电子所产生的作用力。它是一种比较弱的、非特异性的作用力。 往往由原子团相互接近诱导所致。原子间的距离相互靠近到大约0.4～0.6nm(4～6A?)时,这种力就表现出较大的集合性质。 3、疏水作用 疏水作用是疏水基团避开水相而相互聚集所产生的能量效应。是稳定蛋白质三、四级结构的主要作用力。 高分子的蛋白质可形成分子内疏水链、疏水腔或疏水缝隙,稳定蛋白质的高级结构 4、离子键 盐键－离子键、静电引力 正负带电基团之间的吸引力 如NH4+、COO－ 蛋白质的二级结构 1、?-螺旋 A.多肽链的主链绕 “螺旋轴” 每3.6个AA上升一圈,螺距0.54nm,每个氨基酸残基沿轴上升0.15nm,螺旋上升时,每个残基沿轴旋转100o。每个肽键的C＝O与前面第3个肽键的N-H之间形成氢键(13元环),α-螺旋也称3.613-螺旋。肽链上所有的肽键都参与氢键的形成。 ?-螺旋 B.螺圈间氢键的取向与中心轴平行,是维系α-螺旋的主要作用力。 C.侧链R在螺旋的外侧 D.天然蛋白质分子多为3.613 ?-螺旋。 平行?-折叠的结构比较（a） ?-园桶形排布，（b）马蹄形排布 3、?-转角 无序结构示意图 第三节 纤维状蛋白质 一、?-角蛋白 多肽链以卷曲的螺旋结构装配而成。 角蛋白的二硫键与烫发 二、丝心蛋白 丝心蛋白这是蚕丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。丝心蛋白具有抗张强度高（弹性好）,质地柔软的特性,但不能拉伸（伸展性差）。 胶原蛋白或称胶原(collagen)是很多脊椎动物和 无脊椎动物体内含量最丰富的蛋白质，它也属于结 构蛋白质,使骨、腱、软骨和皮肤具有机械强度。 作用： 腱的胶原纤维具有很高的抗张强度,约为20-30kg／ mm2,相当于12号冷拉钢丝的拉力。 骨铬中的胶原纤维为骨骼提供基质,在它的周围排 列着磷酸钙聚合物结晶。 脊椎动物的皮肤含有编织比较疏松,向各个方向伸 展的胶原纤维。 血管亦含有胶原纤维。 一级结构分析表明，其肽链的96%都是按 三联体的重复顺序：(g1y—x—y)n 排列 而成。Gly数目占残基 总数的三分之一， X：Pro， y：Hpro(羟脯氨酸) 和Hlys（羟赖氨酸） 生物体内胶原蛋白网 (１) α－螺旋（α－helix） (２) β－折叠（β-pleated sheet） (３) β－转角（β-turn） (４) 无规则卷曲（nonregular coil） 蛋白质的二级结构（secondary structure）指多肽主链上的原子的空间排列方式 主要有以下类型： 嫩抵筏消岭雕胜掺模循乐皑冶吸擦皮飘眩笛献类存械叭钒