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山东农业大学 动物传染病诊断与现代诊疗技术 减蛋综合征的诊断与防治 学 院 动物科技学院 专 业 兽医硕士 学生姓名 ******* 学 号 指导老师 减蛋综合征的诊断与防治 摘要：减蛋综合征病毒（EDSV）是禽腺病毒属禽腺病毒Ⅲ群的唯一成员，，本文从鸭减蛋综合征的防治机制的进展作一综述。 关键词：减蛋综合征；减蛋综合征病毒；诊断；防治；机制 减蛋综合征病毒具有典型的腺病毒形态结构，而且主要感染产蛋鸡。1976年荷兰科学家首次报道了该病，并且命名为产蛋下降综合征，简称EDS-76。世界许多国家都曾有此病流行，造成巨大经济损失,我国部分地区亦有报道,并从发病鸡群中分离到病毒尽管发生本病 的都是产蛋鸡(少数人认为EDS在鸭中可以引起产蛋下降和蛋壳变粗 糙变薄即）但自然宿主是鸭和鹅[6]。国外大多学者认为本病的发病机理 主要是由于在输卵管蛋壳分泌腺有大量病毒分布并产生明显的炎症反应从而导致蛋壳异常。 本病的主要症状是鸡产蛋率下降和产异常蛋。产褐壳蛋的肉用种鸡发病较多，发病鸡群产蛋高峰期产蛋率突然下降，在病的极期多数异常蛋因破损而不能收集，恢复期仍产褪色、薄皮、表面凸凹不平、呈砂纸状的蛋[4]。病鸡轻微下痢，肛门周围常污秽不洁。组织学病变局限于输卵管，黏膜皱褶水肿，有白色渗出物或奶酪样物，卵巢可见成熟卵泡软化的现象。发病极期能见到子宫黏膜固有层、黏膜下层以及肌肉层的疏松结缔组织呈明显水肿，淋巴细胞、浆细胞、伪嗜酸性细胞浸润，子宫腺体萎缩和减少，黏膜上皮细胞变性和剥离，有时细胞核内能见到包涵体[2]。 我国大部分地区均发现了该病原。据耿亚杰等报道，产蛋鸡一旦感染EDS-76后，集群产蛋量无法达到高峰期或产蛋量大幅度下降。有研究发现，该病原存在于鸡的输卵管狭窄部、输卵管伞部、蛋壳分泌部以及鼻粘膜等上皮细胞中，且输卵管峡部是检测和分离病毒的最佳部位[19]，并且可随着卵子的形成进入蛋中形成垂直传播[16]。最新有研究发现，该病毒能使9日龄的鸭子出现呼吸道症状[1]。 樱桃谷种鸭群初期症状不期显，采食和外观无异常。后期表现精神沉抑，部分种鸭羽毛松乱，下痢；该批樱桃谷种鸭155日龄才见蛋，开产日龄推迟，产蛋上升缓慢及不能达到产蛋高峰，180日龄产蛋达45%，220日龄时产蛋升到70%，最高峰产蛋率为75%；种蛋合格率明显下降，不合格种蛋比例上升，产畸形蛋、薄壳蛋、破壳蛋，蛋壳表面粗糙，外面布满石灰状物。畸形蛋蛋白、蛋黄正常。后来蛋形变小，蛋重变轻，蛋壳色泽变淡，蛋壳变薄、变软、粗糙。发病后期采食量有明显下降变化。 1 EDSV的基本生物学特性 EDSV病毒粒子的大小约为80nm，呈现二十面体对称，具有典型的腺病毒形态，其DNA的分子质量为22.6×103Kb[14]。EDSV能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，不能凝集哺乳动物的红细胞，对乙醚、氯仿不敏感。 2 EDSV基因组的分析 EDSV是一种无囊膜的双股DNA病毒，基因组全长33213个碱基[12]，通过中和试验仅发现一个血清型，但是用限制性内切酶图谱分析发现不同地区分离的毒株之间DNA序列有所不同。 3 实验室诊断技术 3.1套式PCR检测技术 以优化过程中选择的最适变性温度及时间、退火温度及时间、延伸温度及时间进行PCR反应[13]。在Eppendorf臂中顺序混匀PcR缓冲液、4dNTp、引物、Mgcl、模板和TaqDNA聚合酶。将上述试剂在旋涡式混匀器混匀后-离心5s,94℃水浴5 min，置于冰上冷却，迅速离心数秒，然后加入TaqDNA聚合酶O.5μL；混匀后，加50μL灭菌液体石蜡．盖上盖子．在PCR扩增仪上按以下程序进行第一轮PcR扩增：先94℃预变性5 min，进入三步PCR；94℃变性40s．54℃退火30s，74℃延伸40s。反复35个循环．最后74℃保温6 min。第二轮PCR用内引物[20]。以第1次扩增产物为模板进行扩增。除退火温度改为57℃外其他与第一轮扩增相同。 3.2.1 病毒DNA的提取 将纯化的病毒用SDS（10%）终浓度为1％蛋白酶Ｋ消化饱和酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）抽提沉淀用无水乙醇洗涤，并用TE缓冲液溶解DNA，存于－20℃保存备用。 3.2.2 实时荧光定量RT-PCR 使用THUNDERBIRD qPCR Mix试剂盒，按照20μL反应体系，其中H2O7.26μL;probeqpeRMix10μL;TGEv-Fo.6μL;TGEv-Ro.6μL;TGEV-p0.5μL;3条引物浓度均10μM;50XROXrefereneedyeo.O4μ