动物细胞融合与单克隆抗体.doc

选修三 专题2 动物细胞融合与单克隆抗体 教学目标： （1）知识目标： ⑴ 掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 ⑵ 简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。 能力目标： 让学生了解单克隆抗体的制备过程，指导学生掌握获取生物科学知识和 培养探索生物科学的兴趣。 教学重点： 动物细胞融合、单克隆抗体的制备过程 教学难点： 单克隆抗体的制备过程 教学过程： 动物细胞融合： 复习导入新课 让学生回顾有关植物体细胞杂交技术的基本知识。指出动物细胞与植物细胞的不同，进一步探讨动物细胞是否可以融合或杂交？如果动物细胞进行融合，与植物细胞有什么区别？ 植物细胞A 原生质体制备 原生质体A 人工诱导 植物细胞B 酶解法去壁 原生质体B 融合 人工诱导因素 （二）动物细胞融合： 也称为细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。动物细胞融合的基本原理与植物原生质体融合的基本原理相同，都是依据细胞膜的流动性。但是动物细胞没有细胞壁，不需要酶解。动物细胞自然生长条件下会出现融合的现在，但是多数依靠人工诱导动物细胞融合。 物理：离心、振动、电激 诱导动物细胞融合 化学：聚乙二醇（PEG） 同核、异核 的因素 生物：灭活的病毒（如仙台病毒等） 通过课本图2-23和生物技术资料卡讲解灭活病毒如何诱导细胞融合、如何获得灭活病毒。 总结：细胞融合技术突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能（包括种间，属间、科间的细胞都获得成功），使杂交细胞具有两个亲本细胞的遗传特性。但是，最主要的应用是杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。 单克隆抗体： （一）复习导入新课 让学生回忆的免疫调节中关于抗体的本质，和B淋巴细胞产生抗体的流程。请学生在阅读课本P52的最后一自然段的基础上，讨论一下问题：抗体的传统生产方法如何进行及缺陷是什么？淋巴细胞产生抗体的流程图： 抗原a 吞噬细胞 T细胞 B淋巴细胞 浆细胞 抗a抗体（具有特异性） (二). 抗体的传统生产方法： 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备的抗体特异性差。 .单克隆抗体 要获得大量的纯种抗体，必须得到只产生单一抗体的B淋巴细胞（可以通过单个细胞的分离培养的得到）。但是主要的问题是，得到单一的B淋巴细胞后，由于它是属于高度分化的细胞，在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能增殖的，怎么解决这个问题呢？ 引导学生思考：如果诱变B淋巴细胞，使其可以无限增殖（如癌细胞状态）？但是诱变是不定向的，有可能使细胞丧失产生抗体的能力。所以要采用一种定向的方法让B淋巴细胞既保持产生抗体的能力，又能无限增殖---细胞杂交。 单克隆抗体技术产生的，就是把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行杂交融合，所得到的杂交细胞既能大量增殖，又能产生大量的特异性抗体，这就是极富创造性的杂交瘤实验。 通过课本图2-24详细讲解单克隆抗体的制备过程。 板书： 总结分析单克隆抗体的概念及其优点。让学生看书，回忆单克隆抗体的制备过程，并请学生复述。 板书： 动物细胞融合 单克隆抗体 物理：离心、振动、电激 传统抗体生产 化学：聚乙二醇（PEG） 生物：灭活的病毒 单克隆抗体生产 杂交细胞 膜融合、核融合 物理：离心、振动、电激 化学：聚乙二醇（PEG） 为何要注入抗原？提取得到的B淋巴细胞种类是否单一？为什么 特定抗原 免疫小鼠 体外培养 骨髓瘤细胞（A） B淋巴细胞（多种） 如：B1，B2，B3 杂交融合 多种杂交细胞（同核、异核）如：AA,BB,AB1,AB2,AB3 第一次筛选的目的？筛选后的细胞的种类？ 选择性培养基 多种杂交瘤细胞（异核）如：AB1,AB2,AB3 专一抗体检验，对阳性细胞克隆培养 第二次筛选的目的？ 单克隆杂交瘤细胞 注射到小鼠体内 体外培养 单克隆抗体