专题整合提升2讲解.ppt

突破1　微生物的筛选与鉴定 实验室中微生物的筛选原理是人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长，通过配制特定的培养基或设置特殊条件，进行选择培养，以期获得相应目的菌株。进行菌株筛选除特定的条件设置外，多采用配制选择培养基来完成选择培养。 选择培养基是根据不同微生物对特殊营养需求或对某种化学物质的敏感程度不同，在培养基中加入或除去相应营养物质，或者加入某些化学物质，以抑制不需要微生物的生长，以此将目的微生物从混杂的微生物群体中分离出来的固体培养基，液体培养基一般不能独立完成菌种分离。选择培养基有以下几种： 1．加入特殊营养的选择培养基：有的选择培养基是根据微生物特殊营养的需求来设计的，是在培养基中加入或除去某些培养基成分，改变微生物生存环境，来选择目的菌株。如：在以纤维素为唯一碳源的培养基中可筛选分离出纤维素分解菌；以尿素为唯一氮源的培养基上可筛选分离出尿素分解菌；以石蜡油为唯一碳源的培养基可筛选分离出分解石蜡油的微生物；以蛋白质为唯一氮源的培养基可筛选分离出产生胞外蛋白酶的微生物；以缺乏氮源的培养基可筛选分离出固氮微生物。 2．加入特殊化学物质的选择培养基：在培养基中加入某些特殊化学物质(不作为营养物质，对目的微生物也没有危害)，杀死或抑制其他微生物生长繁殖，以筛选分离目的微生物。 如：在培养基中加入10%的酚，可以将放线菌从细菌、霉菌中分离出来；在培养基中加入青霉素、四环素等抗生素，可以抑制细菌和放线菌生长，从而将酵母菌和霉菌从细菌、放线菌中分离出来；在培养基中加入高浓度食盐，可以将金黄色葡萄球菌从各类微生物中分离出来等。 3．到相应环境条件中或创造相应环境条件来筛选希望得到的目的菌株。如在高温热泉或海底火山口、或高温后沸水中寻找耐热菌(或酶)，冰层中或冰箱冷冻条件中寻找抗寒菌(或酶)；在缺氧的条件下选择培养厌氧微生物；在盐碱条件下寻找耐盐碱抗高渗透压的微生物；在不同pH下筛选嗜酸碱微生物等。 4．用某些特定化学物质与相应菌体或菌体代谢产物所产生的特定的反应现象来筛选或鉴定目的菌株。如在含抗生素的培养基中选择含抗性基因的重组质粒；在加入伊红—美蓝的培养基中，根据菌落呈现深紫色的现象来鉴定筛选大肠杆菌；在纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红来选取具有透明圈的菌落——纤维素的分解菌等。 【突破体验】 1．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为 (　　) A．伊红－美蓝培养基、含青霉素培养基 B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基 C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基 D．含青霉素培养基、伊红－美蓝培养基 解析　酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。 答案　B 突破2　微生物的实验室培养及培养技术 微生物的营养及功能、培养基的配制原则及类型、无菌操作技术等是进行微生物培养与分离必不可少的知识。通过牛肉膏蛋白胨培养基的制备，以及学生尝试探究微生物的分离与培养，为学习微生物的菌种选育、生长规律、影响环境及发酵工程打下坚实基础。 1．培养基制备：计算→称量→溶化→调pH→灭菌→倒平板。 2．无菌技术：主要指消毒、灭菌和无菌操作。 实验室中常用紫外线或化学物质消毒，如培养室、台的紫外线杀菌消毒及用酒精擦拭双手消毒。灭菌的方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，主要是针对培养器具、接种器具和培养基灭菌的方法；另外还需注意操作过程中无菌环境营造，一可以在灭菌的接种箱，二是在酒精灯火焰附近所形成的无菌区。 3．倒平板。严格按照教材操作步骤进行，倒平板时需冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近无菌区倒平板，平板冷却凝固后，将平板倒置，使皿盖在下，皿底在上。 4．平板划线操作。平板划线通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，可得单个分离的菌株。 5．稀释涂布平板。先将菌液进行系列稀释，然后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 6．选择培养基用来分离某种特定的微生物。选择培养基是指允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。在选择培养基配制中要注意起选择作用的成分。如分解尿素的细菌选择培养基的特定成分是以尿素为唯一氮源，而纤维素分解菌的选择培养基中的特定成分为纤维素。 【突破体验】 2．1943年，曾获