14级博士分子生物学实验技术讲义.docVIP

博 士 研 究 生分子生物学实验技术讲义 浙江中医学院生命科学学院目 录实验一、质粒的提取及纯化实验二、DNA琼脂糖凝胶电泳实验三、质粒的酶切及电泳实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备及转化实验五、PCR扩增及电泳实验六、目的片段的回收实验七、哺乳动物组织基因组DNA的提取实验八、哺乳动物组织总RNA的提取c实验九、RT-PCR实验十、植物基因组DNA提取实验十一、Sourthern杂交附录一 、目的片断的回收 实验一 质粒的提取及纯化小量法提取（碱变性裂解法）一、实验目的 用碱性SDS方法快速从大肠杆菌细胞中分离、提取质粒DNA，进行琼脂糖凝胶电泳分离，溴化乙啶染色，在紫外灯下检测。通过本实验，学习和掌握质粒的快速提取纯化、技术。二、实验原理 从大肠杆菌细胞中分离质粒DNA的方法众多，其分离的依据可利用分子大小不同，碱基组成的差异以及质粒DNA的超螺旋共价闭合环状结构的特点来进行。碱变性法抽提效果良好，既经济且得率较高。抽取到的质粒DNA可用于酶切、连接与转化。对于分子量较大拷贝较少的质粒DNA，由于DNA片段较大易于损伤断裂，因此选用氯化铯密度梯度超离心法抽提DNA，具有纯度高，步骤少，方法稳定且获得的质粒DNA是超螺旋构型等特点。对于高拷贝数质粒，用小量制备法抽提质粒DNA就有足够量可用于基因操作。 碱变性抽提质粒D