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《生命科学概论》结课论文 ——重组微生物的安全研究进展及其应用 学校：内蒙古科技大学 学院： 姓名： 学号： 班级： 重组微生物的安全研究进展及其应用 ——《生命科学概论》结课论文 内蒙古科技大学 摘要:微生物可使土壤及污水中的污染物发生降解，但近年来随着污染物中人工合成物质的增加，依靠自然界中的野生微生物已不能使污染物完全降解。通过构建杂合酶、定点突变、基因扩增、改变代谢途径等基因工程方法构建重组微生物，可扩展相关微生物的降解能力。但重组微生物在环境中的稳定性和安全性已日益引起人们的关注，对其生物活性的研究为其安全应用提供了思路。本文还综述了近年来农业重组微生物的研究现状和进展,详细介绍农业重组微生物境释放的监控方法以及对环境的冲击作用,对一些有关生物安全研究的热点问题进行了探讨. 关键词:重组微生物;生物活性;安全应用；农业;重组微生物;生物安全评价;监控方法;环境冲击 前言：工业污染物被排放到环境中，大多数较容易被土壤或水中的微生物降解，而被清除掉。但人工合成的很多非生物物质可能是抗生物降解的，或者可能转化为抗生物降解性产物。要降解这些难降解的污染物，仅靠自然界中的野生微生物是不够的，需要对微生物及其酶系进行改造。因此，近年来，重组微生物大量出现，对基因工程菌的稳定性和安全性问题需要进行长期的系统的研究，因为其风险的出现有长期性和滞后性。重组微生物的安全性问题是细菌遗传改造和应用时必须考虑的重要方面。与此同时,农业微生物基因工程及其产品开发应用已引起了各国政府和公众的普遍关注[1].通过遗传操作手段对野生菌株进行改造,获得具有新的优良性状的工程菌株,因而更具市场开发潜力和竞争力. 1995年第一例商品化生产的重组根瘤菌种衣剂在美国上市.中国农业微生物基因工程研究始于80年代初,经二十余年的攻关已取得重要进展.下面也将简要介绍之.本文分为两个本分第一部分是：重组微生物在环境中的生物活性及安全应用，第二部分为：农业重组微生物生物安全研究进展。 一、重组微生物在环境中的生物活性及安全应用 1重组微生物的生物活性 1.1遗传工程微生物在其目的微环境中的生存和繁殖 人为设计适宜的微生态环境，以评价重组微生物的生存和功能。可以通过在土壤根际或水生微生态环境中同时引人亲本和重组菌株进行对重组微生物的分析，把设计用来降低污染的重组细菌以相当高的数量加人到被污染的土壤或水生微生态环境中，如每克土壤或每毫升生活污水加入10-10$菌落形成单位(CFU)。目前的多数报道着眼于研究被接种到微环境中的这些微生物在起始阶段4一8周内的情况，通常可以观察到重组微生物和它们的亲本菌株都能在土壤根际和水生微环境中生存。在每种生态条件下，细菌的数目趋于达到微环境的容纳能力，因此有机物质丰富的微环境中，微生物的数量通常比营养Iff乏的微环境中高得多，而只有在污染物高达0.1%时，重组菌才能比它们的亲本长的更好。如在补加0.1%对乙基苯甲酸的土壤中接种P. putida EEZ15 ( pWWO -EB62 )，或是在不加0. 1%对甲基苯甲酸的土壤中接种P. putida sp. FR1 (pFRC20)，重组菌的数量均比不补加这类化学物质的土壤要高出一个数量级。 用污水厂废水进行的试验观察到同样的结果。尽管亲本菌和重组细菌在短期试验中都能100%存话，但在长期观察中发现每克土壤CF U值稳定下降，在某些例子中降到低于所能检测的水平范围。 重组和亲本细菌不仅能在土壤中存活，也能增殖。事实上，用低菌量接种后，如将P. putidaEEZ15 (pWWO一EB62)以每克土壤l0aCUF接种于土壤后，可以增殖到每克土壤1护一10 CUF。研究了在Pseudomonas sp. FR1 (PFRC20p) , F113-PCB和P. putide EEZ15 (pWWO一EB62)中所引人的遗传信息的稳定性，这些菌株在遗传上是稳定的，通过遗传操作所获得的表型通常在缺乏选择压力的实验室培养条件下能稳定保存，而且这些菌株的一些与重组表型无关的天然特性如生物控制特性、生长速率、颗粒的产生等性质均保持不变。在末灭菌的糖用甜菜根部土壤微环境中进行的菌落分析证实重组特性不影响F113一PCB菌株在末灭菌的土壤中的竞争能力，这些菌在土壤中是稳定的，在土壤中生长较长时间后所收回的细菌100%都能利用芳香族化合物生长，正如起初所设计的一样。研究野生菌和重组菌对当地微生物的作用显示:不论野生型或重组细菌都不影响原微生态环境中所存在的微生物的生长，这提示自然环境处理外来微生物时具有某种缓冲能力。 同时试验还显示，在生物修复途径中，来自于重组微生物的可能的危险性与其末经