基本概念与理论 受体研究技术学习指导书.pptVIP

Techniques in receptor research 尹长城 北京大学医学部生物物理学系 荧光共振能量转移技术 Fluorescence resonance energy transfer, FRET 荧光共振能量转移的基本概念与理论 受体研究技术 化学技术 免疫共沉淀 放射配基结合分析 物理技术 X-射线衍射 核磁共振 电子显微镜 这些技术 要求较大量的样品 常常只能在非生理条件下完成 很难观察到实时的（real time）分子间的反应 荧光共振能量转移技术 荧光共振能量转移技术是一种物理技术 用分子生物学技术可将待研究分子进行荧光蛋白标记并在细胞表达 研究受体-配基的相互作用 测定受体-配基相互作用的距离 测定受体亲和常数 受体二聚化 受体构象变化 该技术的最显著特点是在平衡条件下，无需分离游离配基和结合配基, 即可测定平衡常数 RBA技术需要分离游离配基和结合配基 荧光共振能量转移技术 FRET的优点 高灵敏度：现在可以用此方法在溶液中或单细胞水平研究单个受体分子 可以和许多技术结合：如显微镜、流式细胞计、共聚焦显微镜、稳态和瞬态荧光光谱，在生理条件即活细胞状态下，选择性地研究分子间的相互作用 可以从商业上得到各种荧光探剂: 用它们可以标记各种所要研究的无荧光特性的分子如配体，因而大大地开阔了研究途径 1.1 荧光与荧光光谱 分子具有不同能级：分子中