定性试验质控培训教案.pptVIP

讲者介绍 许斌，研究员、教授。现任江苏省临床检验中心主任，《中华检验医学杂志》编委、《临床检验杂志》常务编委和中国合格评定国家认可委员会主任评审员。 联系方式：jsccl@(省临检中心） 浓度范围：应围绕该CUT OFF值选择。一般建议阳性质控物浓度为2×CUT OFF 值左右，阴性质控物浓度为0.5×CUT OFF 值左右。高值或超高值阳性血清是用来监控“HOOK效应”的，应该在引进分析方法或试剂盒时评价，不需要长期监控，同时其测定值远高于CUT OFF 值对边缘结果的监控也无任何价值。 灭活：尽管所有的制造商或生产者均声明对已知的经血传播的病原体如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等病原体进行了灭活处理，但应把质控物视为有传染性，因为可能存在灭活不完全以及其他未知的传染性，实际工作中应按生物安全防护的规定进行操作。 冰冻血清的融化和冻干品复溶：免疫活性的质控血清一般需在-20℃以下长期保存，从冰箱取出后建议室温自然融化，一次性使用可以37℃水浴或孵箱快速融化，轻柔地颠倒混匀5次以上；融化的血清置4-8℃保存，而不应该再次-20℃以下保存、反复冻融。冻干质控品用生理盐水（非蒸馏水，除非有特殊说明）复溶，按规定的量准确（应保证每瓶操作的一致性）加入质控品容器中，盖盖后轻柔地颠倒10次以上，保证充分溶解和混匀；安琣瓶应先轻敲摇晃使顶部的冻干粉掉入底部，用砂轮划开颈部轻敲顶部使其掉落在锐器盒中，加样器加生理盐水后反复抽吸10次以上。所有操作应避免气泡产生。复溶后的质控品置4-8℃保存，也可分装小份置-20℃以下保存，只允许冻融一次。融化、复溶、分装后的血清均在标签上标志操作日期、有效期和操作者。 自制质控品 大量的临床免疫项目无商品化的质控物供应，实验室需自制，其步骤为： 1 收集阳性血清(无明显溶血、黄胆、脂肪血和污染血清)到一定量（至少够本室使用6个月以上的量）； 2 传染性病原体需经56℃、10小时灭活后使用； 3 0.2μm生物滤膜过滤，去除纤维沉淀物和细菌； 4 稀释，用正常人血清稀释； 5 测定值，与定值参考品进行对比、求值，无参考品时选择在2倍Cut Off值附近的阳性值； 6 分装小瓶（每日用量），加盖、贴签，-20℃冻存备用； 7 稳定性及瓶间差评价。 Levey-Jennings质控图 横坐标（X轴）： CLIA’88§493.1218(b)定义:测试系统的准确性、精密度保持稳定的一个间隔,不超过24小时。 每个点表明的是分析批或检测日期，当检测日有多个批次时都应标出。 ELISA等板式试验应把每块板视为一个分 析批；发光等均相免疫试验当一个质控失 控，采取了纠偏措施后当天再次做的质控 应视为另外的一个分析批，需在质控图上 标出。 纵坐标（Y轴）： 用吸光度值或含量点图，不推荐用S/C.O点图。至少要引出中心线[质控物靶（均）值]和上下失控限三条线。 中心线：靶值这个词特别容易造成歧义，实验室会误认为定值质控物提供的“靶值”就是绘制质控图中心线的靶值，用质控物均值来表示中心线更恰当。质控图的Y轴中心线应用实验室测定的质控物加权均值作图，无论是定值还是未定值质控物均如此。在启用新批号的质控物时应先与旧批号质控物平行检测3批以上，启动即刻法（Grubbs法）质控规则，建议使用2s规则；至有了20个数据后转入常规的质控方法。 失控限：Westgard质控规则并不完全适合。 1）其方法和试剂由于免疫学的特性、原材料等生产工艺问题使其变异较大，一般批内cv超过15%； 2）免疫反应的曲线是非线性的； 3）质控点测定值呈偏态分布。 临床免疫检验的质控目的就是保证检测结果阳性是阳性、阴性是阴性。 偶然误差的失控规则不能简单地使用13s或武断地使用12s判断是否在控。 利用cut off验证值可以直接确定上下失控限，公式为： 例如：某批号的ELISA乙肝表面抗原试剂的cut off值为0.105，其验证值为0.067，阳性质控物均值为0.215，则阳性失控上限为： 0.215×[1+（0.105-0.067）/0.105]=0.292； 阳性失控下限为： 0.215×[1-（0.105-0.067）/0.105]=0.137。 在Y轴上的三个点为：0.292、0.215、0.137。 同样，阴性质控物的均值如为0.058，则应用阳性失控限公式得到的cut off 验证值比例为36%，计算得到阴性质控在Y轴上的三个点为：0.079、0.058、0.037。 系统误差的失控规则可以选用41s和/或10x，也就是要求质控图始终保留20个点以上的原因。 阴、阳性质控物的测定值均应在质控图中标出： 阳性重点是下限，阴性重点是上限，这样的单个超限判为失控； 阴、阳性同