第一章 绪论教材分析.ppt

第七节 酶工程的发展历程 1 酶工程研究的奠基：以工业化酶制剂生产为主要内容的酶工程雏形阶段（50年代）； 2 酶固定化技术和细胞固定化技术研究始于60年代； 3 70年代基因工程崛起，将酶工程技术研究引向深入并赋予了新的内涵； 4 1971年第一次国际酶工程会议的召开，标志了酶工程学科和完善的技术体系的形成； 第七节 酶工程的发展历程 5 80年代实现了克隆酶的突破；（Wager将青霉素酰化酶基因克隆到Ecoli菌株 质粒上，获得了高效表达） 6 80年代形成了酶固定化技术、细胞固定化技术研究等酶工程的研究热点，并广泛产业化应用. 开始了转基因技术和酶化学修饰技术； 7 90年代形成了以遗传工程为先导的酶工程技术分支——生物酶工程（包括酶基因克隆表达和基因修饰） * * * * * 转移酶催化基团转移反应，即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。例如， 谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。 2、 转移酶 Transferase 水解酶催化底物的加水分解反应。 主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。 例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应： 3、 水解酶 hydrolase 裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及其逆反应。 主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。 例如， 延胡索酸水合酶催化的反应。 4、 裂合酶 Lyase 异构酶催化各种同分异构体的相互转化，即底物分子内基团或原子的重排过程。例如，6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。 5、 异构酶 Isomerase 合成酶，又称为连接酶，能够催化C-C、C-O、C-N 以及C-S 键的形成反应。这类反应必须与ATP分解反应相互偶联。 A + B + ATP + H-O-H ===A ? B + ADP +Pi 例如，丙酮酸羧化酶催化的反应。 丙酮酸 + CO2 ? 草酰乙酸 6、 合成酶 Ligase or Synthetase 一、酶活力与酶活力单位 二、酶的转换数与比活力 三、酶活力测定方法 四、酶活力测定条件与注意事项 第五节 酶活力测定 一、酶活力与酶活力单位 酶活力(enzyme activity)也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。 检查酶的含量及存在,不能直接用重量或体积来表示,常用它催化某一特定反应的能力来表示,即用酶的活力来表示。 酶活力的高低是研究酶的特性、进行酶制剂的生产及应用时的一项必不可少的指标。 酶活力单位 酶活力高低用酶活力单位（U）来表示。 国际酶学委员会曾规定： 在特定条件（25℃、具有最适底物浓度、最适温度、最适pH和离子强度系统）下，每分钟内能转化1μmol底物或催化1μmol产物形成所需要的酶量为1国际单位（IU）。 一、酶活力与酶活力单位 二、酶的转换数与比活力 酶被底物饱和时每秒钟每个酶分子转换底物的分子数，称为转换数（或催化常数，Kcat）， 表明酶的最大催化效率。 转换数的倒数即为催化周期：一个酶分子每催化一个底物分子所需的时间。 乳糖脱氢酶转换数为1000/秒，则它的催化周期为10-3秒。 比活力（性）是酶纯度的量度，即指：单位重量的蛋白质中所具有酶的活力单位数，一般用IU/mg蛋白质表示。 一般来说，酶的比活力越高，酶越纯。 补充：比活力（性） 酶活力与底物浓度、酶浓度、pH、温度、激活剂、抑制剂的浓度以及缓冲液的种类和浓度都密切相关。酶活性测定可用终止反应法或连续反应法。 三、酶活力的测定方法 （一）终止反应法 终止反应法是将酶反应按时间即刻完全停止，取出反应物或产物，予以分离，再确定反应物的消耗量，或产物的形成量，算出酶活性。产物的测定方法可用酶法、化学法或放射化学法。 （二）连续反应法 连续反应法无需终止反应而是在酶反应过程中用光学仪器来监测反应进行情况。其中以光谱吸收的变化更为准确。 比活力（性） 三、酶活力的测定方法 首先,测定的酶反应速度必须是初速度,只有初速度才与底物浓度成正比。初速度的确定一般指:底物消耗量在5%以内,或产物形成量占总产物量的15%以下时的速度。 其次,底物浓度、辅因子的浓度必须大于酶浓度(即过饱和),否则,底物浓度本身是一个限制因子,此时的反应速度是两个因素的复变函数。 四、酶活力测定中应注意的几个问题 第三,反应必须在酶的最适条件(如最适温度、pH和离子强度等)下进行。 此外，测定酶活性所用试剂中不应含有酶的激活剂、抑制剂；同时底物本身不要有裂解。用反应速度（v）对酶浓度（[E]）作图，应得一条通过原点的直线，即v为[E]的线性函数。 四、酶活力测定中应注意的几个问题 酶的生产是指经