生物化学第三章核酸的结构与功能要点.ppt

3.7.4 核酸的变性 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 破坏了氢键和碱基堆积力，使核酸分子高级结构改变、理化性质及生物活性发生改变，不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变。 变性后，260nm的紫外吸收值明显增加，即产生增色效应 DNA的变性 核苷酸骨架上3′，5′-磷酸二酯键的断裂称为降解 DNA解链时的紫外吸收变化 完全变性后核酸紫外吸收值增加： 天然DNA↑25~40%、RNA↑约1.1% 实质：碱基暴露 RNA本身只有局部的双螺旋区，所以变性行为所引起的性质变化没有DNA那样明显 热变性 变性过程是“跃变式”的，而非渐变 如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度（melting temperature, Tm）。 Tm的影响因素 ① G-C对含量 G-C对含3个氢键，A-T对含2个氢键，故G-C对相对含量愈高，Tm亦愈高 ② 溶液的离子强度 离子强度较低的介质中， Tm较低。在纯水中，DNA在室温下即可变性。需核酸变性时，常采用离子强度较低的缓冲溶液