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第五章 发酵工艺控制 重点掌握: 温度、pH、溶解氧、菌体浓度、基质浓度、二氧化碳、泡沫等因素对发酵过程的影响. 一、发酵过程的主要控制参数 (1) 温度 最适生长温度与最佳代谢产物合成温度往往不同。 (2)pH 菌体的代谢影响培养基的pH,培养基的pH又影响菌体的生长和酶系统活性和代谢途径. (3)溶解氧的浓度(DO) 溶解氧是需氧菌发酵的必要条件。 (4)基质含量 要保证菌体生长、维持生存、避免抑制、合成产物等不同目的和阶段的工艺需要。 (5)空气流量 空气灭菌系统、流量、温度、目的是供氧。 (6)罐压 正压防止空气中的杂菌侵入发酵液,罐压过高时CO2 浓度陡增,负面作用。 (7)搅拌速度 延长空气的停留时间,提高溶氧;促进菌体与培养基之间的质量传递。过高时会损伤菌体、产生过多的泡沫。 (8)搅拌功率 其成本比重较大。 (9)粘度 菌体浓度增大时,粘度增加,溶氧下降。 (10)浊度 能直接反应菌体的浓度,但不能区分菌体的死活。 (11)料液流量 连续发酵时,涉及稀释率. (12)产物浓度 生产目标。 (13)氧化还原电位 其原因往往十分复杂。测量手段有待开发。 (14)废气中的氧含量 (15)废气中的CO2 从中可了解生产菌株的呼吸代谢规律。 (16)菌丝形态 判别种子质量、区分发酵阶段、确认染菌的重要依据。 (17)菌体浓度 是确定补料量、供气量、阶段转换的重要依据。 二、发酵过程的参数检测 1.直接状态参数 2.间接状态参数 3.离线发酵分析方法 1.直接状态参数 直接反映发酵过程微生物生理代谢状况的参数。如pH、DO、溶解CO2、尾气O2、尾气CO2、黏度等。 在线检测 传感器 2.间接状态参数 指那些采用直接状态参数计算求得的参数。 比生长速率,摄氧率(OUR),CO2释放速率,呼吸商(RQ),KLa。 可以提供反应过程状态、反应速率、设备性能、设备利用效率等信息。 3、离线发酵分析方法 从发酵液中取出样品进行离线分析, 分析菌体浓度,形态、培养基成分和产物成分及含量。 显微观察,细胞体积,干重,光密度,平板计数及基质及产物分析等。 第1节 温度对发酵的影响及其控制 一、影响发酵温度的因素 二、温度对微生物的生长的影响 三、温度对发酵的影响 四、最适温度的选择 一、影响发酵温度的因素 发酵热:发酵过程中释放出来的净热量。 菌分解基质产生热量, 搅拌产生热量, 罐壁散热, 水分蒸发、空气排气带走热量, 发酵热引起发酵温度的上升。发酵热大,温度上升快;发酵热小,温度上升慢。 生物热Q生物 微生物在生长繁殖过程中,产生热量,部分用来合成高能化合物,供微生物合成和代谢活动的需要,部分用来合成产物,其余部分则以热形式散发出来,这部分热叫生物热。 例如 一摩尔葡萄糖彻底氧化成水和二氧化碳 好氧:产生287.2千焦热量 183千焦转变为高能化合物 104.2千焦以热的形式释放 厌氧:产生22.6千焦的热量 9.6千焦转变为高能化合物 13千焦以热的形式释放 葡萄糖转化为高能化合物的热量分别占63.7%和42.6%,放出的热量分别为104.2千焦和13千焦。微生物的好氧培养产生的热比厌氧培养多。 生物热的产生具有强烈的时间性 1. 初 期:适应期,菌量少,呼吸慢,热量少 2. 对数期:菌量大,呼吸旺盛,热量多 3. 合成期:菌体合成减缓,靠已合成的酶进行反应,产热减少,温升小。 如果培养前期温度上升过缓,发酵不正常;若培养前期温度上升过于剧烈,有可能染菌。 此外培养基营养越丰富,生物热也越大。 搅拌热Q搅拌 搅拌热与搅拌功率有关,可用下式计算: Q搅拌=P*860*4186.8J/h P——搅拌轴功率 860*4186.8——机械能转变为热能的热功当量 蒸发热Q蒸发 通气时引起发酵液的水分蒸发所需的热量叫蒸发热,此外排气也会带走部分热量叫显热Q显,显热很小,一般可忽略。 辐射热Q辐射 发酵罐内温度与环境温度不同,发酵液中有部分热通过罐体向外辐射。辐射热的大小取决于罐内与环境的温差。冬天大一些,夏天小一些。 Q发酵=Q生物+Q搅拌-Q蒸发-Q辐射 二、温度对微生物的生长的影响 微生物生长对温度要求不同,大致可分为: 嗜冷菌: 20℃ 最大 0℃~26℃生长, 嗜温菌: 30~35℃ 15℃~43℃生长, 嗜热菌: 50℃ 37℃~65℃生长。 最适温度 最高温度 最低温度 在最适温度范围内,微生物生长迅速,生长速率随温度升高而增加,温度增
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