凝胶层析技术(凝胶过滤)讲解.ppt

凝胶层析技术（凝胶过滤） 湖南师大生科院-2012 目前使用较多的是葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶 聚丙烯酰胺凝胶，其商品为生物凝胶-P（Bio-Gel P）组成单位是丙烯酰胺（CH2=CH-CONH2）与甲叉双丙稀酰胺，共聚交联成聚丙烯酰胺。 优点：全惰性的，适宜作为凝胶层析的载体。 缺点：不耐酸，遇酸时酰胺键会水解成羧基，使凝 胶带有一定的离子交换基团，一般只在pH为11范围内使用。 交联葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex）。 优点：具有良好的化学稳定性等优点。目前最常用。 其结构如图： 实验步骤 1、凝胶的预处理 （1）凝胶在使用前必须在过量的溶剂中充分地膨胀，否则影响层析的均一性，甚至使柱破裂，自然溶解需24小时以上，加热至沸需2小时即可。 （2）用倾斜法除去混杂的小颗粒，重复2-3次。 2、凝胶的装填 装柱是凝胶层析中最重要的一步操作。 a.将柱垂直安装好 b.在柱内先装入1/5的水，用玻棒搅拌凝胶沿玻棒倒下待凝胶开始沉降时，打开出口。凝胶床必须装得均匀，尽量一次装完，以免出现不均匀的凝胶带，因此，在装柱时需打开下口，并调节适当的流速。 c.连接恒压洗脱瓶，平衡流速，开始流速不能太大，应低于层析时所需的流速。 d.经平衡后的凝胶床顶部留下1ml左右的液体。 关闭出口管上的螺旋夹。 。 3、样品的加入 吸取1ml血红蛋白——核黄素混合液，加到凝胶床的表面上，