第二章核酸技术总结.ppt

第三部分 核酸（nucleic acids) 介绍核酸的分类和化学组成； 重点讨论DNA和RNA的结构特征； 初步认识核酸的结构特征与其功能的相关性； 介绍核酸的主要理化性质 介绍核酸研究的一般方法。 （二）证明DNA是遗传物质 著名的肺炎球菌转化试验 1944年 O.T.Avery DNA是遗传物质 2. 噬菌体转化试验 1952年 A.Hershey M.Chase 进一步证明DNA是遗传物质 1944年，Avery在离体条件下完成肺炎双球菌转化实验 1952年，Hershey和Chase 噬菌体感染实验 （三）核酸研究的蓬勃发展时期 1953年 J.Watson F.Crick DNA双螺旋模型 1958年 Crick提出了中心法则 1960s 操作子学说；测定了酵母丙氨酸tRNA的核苷酸 序列；破译了遗传密码 1970s Boyer 发现了第一个EcoRⅠ DNA重组技术诞生 1980s PCR技术的发明；核酶的发现 1986年 H.Dulbecco HGP 2003年 HGP全部完成 非编码RNA （Non-coding RNA） 指不编码蛋白质的RNA。其中包括rRNA，tRNA，snRNA，snoRNA 和microRNA 等多种已知功能的 RNA，还包括未知功能的RNA。这些RNA的共同特点是都能从基因组上转录而来，但是不翻译成蛋白，在RNA 水平上就能行使各自的生物学功能。 非编码RNA 从长度上来划分可以分为3类： 小于50 nt，包括microRNA，siRNA，piRNA； 50 nt到500 nt，包括rRNA，tRNA，snRNA; snoRNA，SLRNA，SRPRNA 等等； 大于500 nt，包括长的mRNA-like 的非编码RNA，长的不带polyA 尾巴的非编码RNA等等。 DNA分子中具有特定生物学功能的片段称为基因（gene）。 为RNA和蛋白质编码的叫做结构基因 具有调节功能的叫调节基因 一个生物体的全部DNA序列称为基因组（genome）。 基因组的大小与生物的复杂性有关，如病毒SV40的基因组大小为5.1×103bp，大肠杆菌为5.7×106bp，人为3.2×109bp。 核酸的结构 糖的命名 D.L --以C4上羟甲基在含氧环上的排布而决定的。 如果氧环上的C原子按顺时针方向旋转　 羟甲基在平面之上为D-型，在平面之下为L-型 α.β--以半缩醛羟基在含氧环上的位置定的。　　在D-型中，半缩醛羟基在平面之下为α型，在平面之上为β型  五元环叫“呋喃型”，六元环叫“吡喃型” （3）稀有碱基 嘌呤——次黄嘌呤、 N6N6二甲基腺嘌呤（m62A)，N6-异戊基腺嘌呤 嘧啶——5-甲基胞嘧啶、二氢尿嘧啶、4-巯尿嘧啶、假尿嘧啶 都是基本碱基的化学修饰型如：甲基化，硫化，氢化等 “稀有核苷”是由“稀有碱基”所生成的核苷。 四、核苷酸 （nucleotide) 5′-磷酸核苷酸的基本结构 核苷酸 5?-核苷酸又可按其在5?位缩合的磷酸基的多少，分为一磷酸核苷（核苷酸）、二磷酸核苷和三磷酸核苷。 第三节 核酸的分子结构（掌握） 一、核酸 的一级结构 （一）定义 （二）连接方式 (三）一级结构的表示法 三、DNA的二级结构——双螺旋结构模型 DNA双螺旋结构是DNA二级结构的一种重要形式，它是Watson和Crick两位科学家于1953年提出来的一种结构模型（获1962年度诺贝尔奖）。 20世纪的三大发现之一 如何发现的，发现的依据？ 依据一 Chargaff 研究小组的贡献 Chargaff规则： （1）A=T （2）G=C （一） DNA双螺旋结构模型要点 （Watson, Crick, 1953） （一） DNA双螺旋结构模型要点  （Watson, Crick, 1953） 5. 双螺旋内側的碱基，与对側碱基形成氢键互补配对（配对原则：A=T; G?C） 。 （二）DNA的双螺旋结构的意义 三种DNA双螺旋构象比较 5、三股螺旋( triplex DNAs ) 回文序列 双链DNA序列中的一段倒置重复序列。 单条核酸序列内以对称点为中心，两侧碱基互补的核心序列区域。 含有该区域的双链DNA从不同方向阅读不同单链时其序列一致。 短的回文结构可能是一种特别信号，如限制性内切酶的识别序列 长的回文序列通常是DNA结合蛋白的识别部位。 DNA分子间的三