第七章病毒技术总结.ppt

第七章病毒 第一节——概述 非细胞生物的种类: 人类对病毒的发现和认识过程 二、形态 ①螺旋对称的病毒粒子 ②二十面体对称病毒粒子 ③复合对称的病毒粒子 2.病毒的蛋白质 五、群体形态 (2)噬菌斑(plaque) 六、病毒的测定 1、病毒的物理颗粒计数 （1）电镜下直接计数 （2）血细胞凝集试验 许多有包膜的动物病毒能在一定条件下凝集一定种类的脊椎动物红血球，凝集量与病毒浓度成正比。 2、病毒的感染性测定 病毒感染单位：能引起宿主或宿主细胞一定特异性反应的病毒最小剂量。 噬菌体效价--------指噬菌体的浓度，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有的噬菌斑形成单位（plaque forming unit/ml或pfu/ml)表示其效价。 ②单层平板法 用无菌吸管各吸取指示菌、检样于灭菌培养皿中，将冷到45℃的单层培养基倒平皿，并与指示菌、检样混匀，32℃、12小时观察，也可直接将三种混合再倒平皿。 ③平板点滴法 ④平板交叉划线法 （2）终点法 方法：取等体积的经10倍或2倍稀释的病毒系列稀释液分别接种同样的实验单元（如某种动、植物、鸡胚或细胞培养）经一定时间，以实验单元群体中的半数（50%）个体出现某一感染反应所需的病毒剂量来确定病毒样品的效价称半数效应剂量，并以实验单元群体中的半数（50%）个体出现某一感染反应的病毒稀释液的稀释度的倒数的对数值表示。 半数效应剂量有不同的表示： 半数致死剂量指使半数试验宿主死亡的病毒剂量； 半数感染剂量指使半数试验宿主发生感染的病毒剂量； 半数组织培养感染剂量指使半数组织培养物遭受感染发生细胞病变的病毒剂量。 三、病毒的鉴定 1、根据病毒感染的宿主范围及感染表现鉴定 2、根据病毒的理化性质鉴定 3、血细胞凝集性质鉴定 4、血清学鉴定 5、分子生物学学方法 第三节 病毒的繁殖方式 一、病毒的复制周期 病毒是通过感染寄主细胞后。控制宿主细胞的整套生物合成机构，利用它的合成材料，按照病毒的遗传特性，合成病毒的核酸与蛋白质。然后组装成新的病毒粒子，故称增殖。 ★一步生长（One-step growth) 二、 病毒的复制过程 吸附 释放 侵入（脱壳） 装配 病毒大分子合成 （二）侵入与脱壳 1、噬菌体 ①尾部未端附着在敏感细菌表面，尾丝撒开并固着于细胞上。 ②尾部产生溶菌酶水解细胞的肽聚糖，使细胞壁产生孔洞。 ③尾鞘收缩，将尾髓压入细胞。 ④头部的DNA通过尾髓的注入而注入细胞，蛋白质外壳留在胞外。 （三）病毒大分子合成 病毒核酸复制 病毒核酸转录 病毒蛋白质翻译 T4噬菌体的dsDNA， 早期转录------早期蛋白 　　 酶 次早期转录-----次早期蛋白 酶 晚期转录------晚期蛋白 （结构蛋白等） （三）病毒大分子合成 1、合成过程： ①病毒早期基因的表达，合成与病毒复制有关的酶； ②病毒基因组的复制，合成子病毒核酸； ③病毒晚期基因的表达，合成病毒衣壳蛋白及与病毒释放有关的酶。 2、合成部位：大部分DNA病毒，DNA在核内合成，蛋白质在细胞质内合成；大部分RNA病毒，RNA与蛋白质均在细胞质内合成。 （四）病毒的装配 1、DNA病毒 在细胞质中合成的蛋白质运到细胞核内，在核中装配。 RNA病毒 细胞质中合成，细胞质中装配。 2．有被膜的病毒从细胞质膜中获得被膜。 3、装配过程： 噬菌体：①先将大分子DNA聚缩成多角体。 ②外壳蛋白质将多角体DNA包围起来合成头部。 ③基板、尾髓、尾鞘构成尾部并与头部连接。 ④加上尾丝而装配成完整的子代噬菌体粒子。 烟草花叶病毒：①蛋白质聚合成圆盘状聚合物。 ②圆盘状聚合物一圈一圈地螺旋堆叠构成衣壳③DNA镶嵌在圆盘状聚合物凹槽处。 动物病毒：⌒无包膜病毒先装配形成前壳体，再与核酸结合成完整的病毒颗粒。 ②有包膜病毒首先形成核壳，再包上包膜。 （五）释放 1、无被膜的病毒 装配完成后合成溶解细胞的酶，使宿主细胞裂解，子代病毒粒子一齐释放，可反复感染周围细胞，出现空斑，枯斑等。 2、有被膜的病毒 以出芽方式或细胞排废作用逐个释放，被膜来自寄主细胞膜，有的还裹有核膜（带双层膜）。 第四节 病毒的非增殖性感染 一、非增殖性感染类型 1、流产感染 分依赖于细胞的流产感染和依赖于病毒的流产感染 2、限制性感染 具瞬时允许性。 3、潜伏感染 二、缺损病毒 缺