PUMA在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的作用.doc

PUMA在大鼠胰腺移植缺血-再灌注损伤中的意义 崔海宁 张克君 王正文 【摘要】　目的　探讨PUMA在移植胰腺缺血再灌注损伤中的早期促凋亡作用。方法　对封闭群大鼠建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型.再灌注后第0 、1 、2 、3 、4 、6 、9 、12 h 等时点, 每时点处死5只大鼠,切取移植胰腺,石蜡包埋切片,原位DNA缺口末端标记( TUNEL) 法测定胰腺组织细胞凋亡, Western blot方法测定移植胰腺组织PUMA,bcl-2 、bax、 caspase-3蛋白表达. 结果 再灌注术后第0 、1 、2 、3 、4 、6 、9 、12 h,胰腺细胞凋亡数分别为(29.42 ±4.93) 、(47.65 ±6.43) 、(74.8 ±9.73) 、(106.35 ±16.8) 、( 148.71 ±19.50) 、(123.96 ±15.54) 、( 97.32 ±10.6) 和(57.42 ±9.56)个/ 高倍视野。各时点均显著高于正常胰腺23.48 ±4.26。第4小时细胞凋亡数明显增高,12小时降低到最低值,不同组细胞凋亡数的差异有统计学意义( v=42 t=2.785 P0.01); PUMA以及其下游的 bax和caspase-8蛋白表达在第4小时达到最高峰, 12小时降低到最低值, bcl-2在第4小时达到最低值,蛋白表达差异分别有统计学意义(P0.05), 以后逐渐升高,12小时降低到最低值, PUMA表达与各时点的细胞凋亡数有明显的正相关 ( n=5,r=1.00,p0.05) 结论　I/RI后细胞早期凋亡与PUMA活化有关, PUMA是通过调节下游bax、caspase-8、bcl-2基因发挥凋亡促进作用 【关键词】　胰腺移植; 缺血再灌注损伤;凋亡;PUMA蛋白; 　 The effect of PUMA expression in Rat pancreatic allografts during ischemia-reperfusioninjury ZHANG Ke-jun,LI De-chun Zhu Xing-Guo,et al. The First Affiliated Hospital of Soochow University ,General surgery ,Suhou China 215006. 作者单位: 张克君,李德春,朱兴国, 朱东明 苏州大学第一附属医院 普外科 215006 【Abstract】　Objective 　To study the pro-apoptosis effect of PUMA protein in pancreatic allografts during ischemia-reperfusion injury. Methods SD and Wistar rats were used as donors and recipients. To establish a rat model of pancreasticoduodenal transplantation with venacava drainage and enteric drainage. At 0 ,1 ,2 ,3 ,4 ,6 ,9 ,12 h after transplantation , 5 animals were sacrificed at each time point in each group. The pancreatic grafts were removed for apoptosic analysis by using TUNEL assay, and the protein of PUMA,bcl-2 、bax、 caspase-3 was analized by using western blot.Results 　The number of apoptosic cells in pancreatic grafts was (29.42 ±4.93) 、(47.65 ±6.43) 、(74.8 ±9.73) 、(106.35 ±16.8) 、( 148.71 ±19.50) 、(123.96 ±15.54) 、( 97.32 ±10.6) and (57.42 ±9.56) / 400×field respectively; The number of apoptosic cells in 4h were significantly increased as compared with the other groups at each time point ,and . significantly dec