ras癌基因产物P21在宫颈癌中过度表达临床意义.doc

ras癌基因产物P21在宫颈癌中过度表达的临床意义 邹先进 蔡兰 蔡明秀 应用ras—P21单克隆抗体，免疫组织化学LSAB法，检测ras—在173例宫颈组织中表达状况。其中五正常宫颈10例，宫颈息肉2例，慢性宫颈炎15例，宫颈上皮轻、中度非典型增生（宫颈上皮内瘤变CINⅠ级、Ⅱ级）8例。结果显示所有正常宫颈、宫颈息肉。慢性宫颈炎标本ras—P21表达均为阴性。8例轻、中度非典型增生5例阳性（62.5%），128例宫颈癌标本中，119例阳性（92.%）。在宫颈癌中ras—P21表达率明显高于宫颈良性病变（P0.001）在非典型增生的表达率高于正常宫颈及慢性宫颈炎，差异有显著性（P0.05）。同时还观察到ras—P21在宫颈癌中的表达与癌细胞分化呈负相关，我们的实验结果提示，ras—21作为肿癌相关抗原，用于子宫颈癌的早期诊断有较大的实用价值。 关键词：子宫颈肿瘤 癌基因 单克隆抗体 ras癌基因族的表达产物是由不得188或者说89个氨基酸组成的21KD蛋白。称为21蛋白。ras的点突变可以致癌，同时，癌变过程也有ras癌基因现象。其产物P21在不同的癌瘤中，表达程度不一致［1］。我们用免疫组织化学方法，检测ras癌基因宫颈癌中的表达状况，以探讨其临床意义。 材料与方法 收集我院1987—1993年外检宫颈癌标本128例，最小年龄28岁，最大年龄77岁（平均年龄42岁）。宫颈息肉眼12例（平均年龄37岁）。慢性宫颈炎15例（平均年龄36.5岁）。宫颈上皮轻、中度非典型增生（宫颈上皮内瘤变CINⅠ级、Ⅱ级）8例（平均年龄40岁）。宫颈癌标本其中鳞状细胞癌症118例，按Wentz分型：角化性大细胞型21例；非角化性大细胞型85例；小细胞型12例；宫颈腺宫癌10例；中度分化8例；低分化2例。 标本均用10%福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4um所有标本HE切片均经复查证实。免疫组织化学染色用LSAB法，其方法为：1、切片脱蜡水洗；2、3%过氧化氢孵育5分钟后PBS洗切片3×3分钟；3、加入1：20正常猪血清；4、抖掉猪血清，加入1：20ras—P21单克隆抗体，4C过夜；5、PBS洗切片3×3分钟，加上1：400生物素化兔抗鼠血清，室温下孵育分钟；6、PBS洗片后加上1：400过氧化物酶标记的Strptavidin，37C孵育分钟；7、PBS洗片后DNA显色，复染苏木素。LSAB试剂盒及ras—P21单克隆抗体均为DAKO公司产品，着色观察标准：阳性反应为浆细胞内棕黄色颗粒，按其着色有无及强弱程度划分为：阴性（一）；弱阳性（+），阳性细胞数5%；阳性（++），阳性细胞5—50%；强阳性（+++），阳性细胞50%。 用已知阳性切片做阳性对照，用PBS代替，ras—P21做空白对照。统计学处理系用卡方检测法法。 结果 阳性对照切片染色为阳性，阴性对照染色为阴性。10例正常宫颈标本，12例宫颈息肉，15例慢性宫颈炎ras—P21表达染色均为阴性。8例宫颈上皮轻、中度非典型增生（CINⅠ级、Ⅱ级），3例阴性，4例弱阳性，1例阳性，128例宫颈癌，119例阳性。在宫颈癌ras—P21表达率明显高于宫颈良性病变（P0.001）。见表1，非典型增生表达率高于正常宫颈及慢性宫颈炎，差异有显著性（P0.05）。 表1： ras—P21在宫颈良、恶性病变中的表达率 ras—P21在宫颈鳞癌非角化型表达强度明显高于角化型，差异有高度显著性（P0.01），而在小细胞型表达强度则明显高于非角化型，差异有高度显著性（P0.01）。ras—P21在宫颈腺癌中的表达率为100%，ras—P21在宫颈腺癌中的表达强度与鳞癌中的表达强度比较，差异无显著性（P0.01）。 讨论 有关ras—P21在宫颈癌中的表达，国外已有少量文献报道，其结果互不相同，Symondb［2］的表达率为80.4%,Iwasdka［3］检测38例浸润性宫颈癌，未见1例表达。我们的实验结果为92.9%，明显高于文献报道，其差异可能与标本采集、样本大小、试剂来源及免疫组化染色方法不同有关。文献中所用的染色方法均为ABC法，而我们所有的方法为LSAB法。LSAB法较ABC法敏感6—8倍，且几乎没有非特异性背景差色，我们观察到正常宫颈及宫颈良性病变不表达ras—P21蛋白，宫颈上皮非典型增生（CIN）时，ras—P21已经开始表达，与宫颈良性病变比较，差异有显著性。结果说明轻、中度非典型增生（CINⅠ级、Ⅱ级）的病例中，已有一部分病例具有肿瘤性增生［4］。这对临床治疗有限一定的意义。提示ras——P21表达夺宫颈癌具有早期诊断价值。同时，我们的结果表明，将ras—P21作为肿相关抗原，用于宫颈癌的诊断，有较大的实用价值。 本实验观察到ras—P21表达强度与癌