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ras癌基因产物P21在宫颈癌中过度表达临床意义
ras癌基因产物P21在宫颈癌中过度表达的临床意义
邹先进 蔡兰 蔡明秀
应用ras—P21单克隆抗体,免疫组织化学LSAB法,检测ras—在173例宫颈组织中表达状况。其中五正常宫颈10例,宫颈息肉2例,慢性宫颈炎15例,宫颈上皮轻、中度非典型增生(宫颈上皮内瘤变CINⅠ级、Ⅱ级)8例。结果显示所有正常宫颈、宫颈息肉。慢性宫颈炎标本ras—P21表达均为阴性。8例轻、中度非典型增生5例阳性(62.5%),128例宫颈癌标本中,119例阳性(92.%)。在宫颈癌中ras—P21表达率明显高于宫颈良性病变(P0.001)在非典型增生的表达率高于正常宫颈及慢性宫颈炎,差异有显著性(P0.05)。同时还观察到ras—P21在宫颈癌中的表达与癌细胞分化呈负相关,我们的实验结果提示,ras—21作为肿癌相关抗原,用于子宫颈癌的早期诊断有较大的实用价值。
关键词:子宫颈肿瘤 癌基因 单克隆抗体
ras癌基因族的表达产物是由不得188或者说89个氨基酸组成的21KD蛋白。称为21蛋白。ras的点突变可以致癌,同时,癌变过程也有ras癌基因现象。其产物P21在不同的癌瘤中,表达程度不一致[1]。我们用免疫组织化学方法,检测ras癌基因宫颈癌中的表达状况,以探讨其临床意义。
材料与方法
收集我院1987—1993年外检宫颈癌标本128例,最小年龄28岁,最大年龄77岁(平均年龄42岁)。宫颈息肉眼12例(平均年龄37岁)。慢性宫颈炎15例(平均年龄36.5岁)。宫颈上皮轻、中度非典型增生(宫颈上皮内瘤变CINⅠ级、Ⅱ级)8例(平均年龄40岁)。宫颈癌标本其中鳞状细胞癌症118例,按Wentz分型:角化性大细胞型21例;非角化性大细胞型85例;小细胞型12例;宫颈腺宫癌10例;中度分化8例;低分化2例。
标本均用10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片厚4um所有标本HE切片均经复查证实。免疫组织化学染色用LSAB法,其方法为:1、切片脱蜡水洗;2、3%过氧化氢孵育5分钟后PBS洗切片3×3分钟;3、加入1:20正常猪血清;4、抖掉猪血清,加入1:20ras—P21单克隆抗体,4C过夜;5、PBS洗切片3×3分钟,加上1:400生物素化兔抗鼠血清,室温下孵育分钟;6、PBS洗片后加上1:400过氧化物酶标记的Strptavidin,37C孵育分钟;7、PBS洗片后DNA显色,复染苏木素。LSAB试剂盒及ras—P21单克隆抗体均为DAKO公司产品,着色观察标准:阳性反应为浆细胞内棕黄色颗粒,按其着色有无及强弱程度划分为:阴性(一);弱阳性(+),阳性细胞数5%;阳性(++),阳性细胞5—50%;强阳性(+++),阳性细胞50%。
用已知阳性切片做阳性对照,用PBS代替,ras—P21做空白对照。统计学处理系用卡方检测法法。
结果
阳性对照切片染色为阳性,阴性对照染色为阴性。10例正常宫颈标本,12例宫颈息肉,15例慢性宫颈炎ras—P21表达染色均为阴性。8例宫颈上皮轻、中度非典型增生(CINⅠ级、Ⅱ级),3例阴性,4例弱阳性,1例阳性,128例宫颈癌,119例阳性。在宫颈癌ras—P21表达率明显高于宫颈良性病变(P0.001)。见表1,非典型增生表达率高于正常宫颈及慢性宫颈炎,差异有显著性(P0.05)。
表1:
ras—P21在宫颈良、恶性病变中的表达率
ras—P21在宫颈鳞癌非角化型表达强度明显高于角化型,差异有高度显著性(P0.01),而在小细胞型表达强度则明显高于非角化型,差异有高度显著性(P0.01)。ras—P21在宫颈腺癌中的表达率为100%,ras—P21在宫颈腺癌中的表达强度与鳞癌中的表达强度比较,差异无显著性(P0.01)。
讨论
有关ras—P21在宫颈癌中的表达,国外已有少量文献报道,其结果互不相同,Symondb[2]的表达率为80.4%,Iwasdka[3]检测38例浸润性宫颈癌,未见1例表达。我们的实验结果为92.9%,明显高于文献报道,其差异可能与标本采集、样本大小、试剂来源及免疫组化染色方法不同有关。文献中所用的染色方法均为ABC法,而我们所有的方法为LSAB法。LSAB法较ABC法敏感6—8倍,且几乎没有非特异性背景差色,我们观察到正常宫颈及宫颈良性病变不表达ras—P21蛋白,宫颈上皮非典型增生(CIN)时,ras—P21已经开始表达,与宫颈良性病变比较,差异有显著性。结果说明轻、中度非典型增生(CINⅠ级、Ⅱ级)的病例中,已有一部分病例具有肿瘤性增生[4]。这对临床治疗有限一定的意义。提示ras——P21表达夺宫颈癌具有早期诊断价值。同时,我们的结果表明,将ras—P21作为肿相关抗原,用于宫颈癌的诊断,有较大的实用价值。
本实验观察到ras—P21表达强度与癌
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