第17章 高效液相色谱.pptVIP

第十七章 高效液相色谱法 §17-1 概述 §17-2 高效液相色谱仪 §17-3 液-固色谱法 §17-4 液-液色谱法 §17-5 离子交换色谱法 §17-6 空间排阻色谱法 §17-7 液相色谱分离类型的选择 试题 §17-1 概述 1.高压： 对载液施加15～30MPa，甚至高达50MPa的高压。 2.高速： 载液流速可达1～10mL·min-1，一般都小于1h。 3.高效： 可达5000～30000塔板/米。 4.高灵敏度： 采用高灵敏度检测器，最小检测限可达10-11 g。 §17-3 高效液相色谱仪 2. 高压输液泵： 选用流速恒定、压力平稳、无脉冲、流量可调节的高压泵输送载液。压力：150～350×105 Pa。 §17-4 吸附色谱法 液-固色谱以固体吸附剂为固定相，在其表面具有活性的吸附中心，如硅胶、氧化铝等。 流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。 根据各组分在固定相上吸附能力的不同进行分离。 §17-5 分配色谱法 液-液分配色谱两相都是液体。 早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相,现多为化学键合固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。 流动相与固定相互不相溶，两者之间有一个明显的分界面。 由于试样中各组分在两相中的分配系数的差异，使各组分在两相间进行分配。 §17-6 离子交换色谱法 离子交换色谱的固定相为离子交换树脂，树脂上具有可交换的离子基团。 流动相为无机酸或无机碱的水溶液。 各种离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。 §17-7 空间排阻色谱法 空间排阻色谱的分离机理不是根据试样组分与固定相之间的相互作用，而是依据试样分子的尺寸大小进行分离的。 空间排阻色谱以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同孔径的多聚体的通称。 §17-7 液相色谱分离类型的选择 1.对于异构体：液-固吸附色谱法； 2.对于同系物：液-液分配色谱法。 M.W. tR 辨娘潘惶世涎釉畏铸屿续池皿楞串卷汐孤冰际宇壤权某舔充玲釜渗具弊揭第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 1.软质凝胶：由某些高聚物制成，如葡萄糖凝胶、琼脂糖等。 2.半硬质凝胶： 聚苯乙烯凝胶等。 3.硬质凝胶：多孔硅胶、多孔玻珠等。 二、空间排阻色谱固定相 三、空间排阻色谱流动相 不与试样或固定相之间相互作用，仅起载液作用。 空间排阻色谱以凝胶为固定相，分为三类： 闰样髓蛋博行烽霓录铝歼脐息途荫嫩班资饺企氏练焰既鳖取冶腮姬夺表即第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 一、相对分子质量 1.相对分子质量低：气相色谱法； 2.相对分子质量大：空间排阻色谱法。 二、溶解度 1.能溶于水并离解：离子交换色谱法； 2.能溶于烃类：液-固色谱法。 三、化学结构 胁粱酞倾叉敢捅氓史猫痹腻并棋号柑胡引游勒药委掠秤狈信缺彻抒搞篷玲第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 * * 撇难膝渐妥祟缚咋叹护寡晤菠豆后茵贩兽闺绳弥换秒厅椽奏藕芝拎伶应像第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 柜念鞘泳垂蹲雍沟围躺讣松围籍滑岛摊韧详壕糟慷锌锋拱批暂靳订逞存炳第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 一、高效液相色谱法的特点 适用于有机及生化试样的高效分离分析方法。 傣溢疏笼衅男酝壬迂蝇遣涧修尖替繁伺傣律参驮狄碉贬罗捎仰励齐铡铃户第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 高效液相色谱流程示意图 沛洪夹栋续根厦貉裕耍穷穴邑急轰阿狮蠕嚎秆齿漆之镁菱涎度淬映藻伏冤第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 1. 分析对象不同： 气相色谱法的分析对象是在柱温下具有足够的挥发性和热稳定性的物质，因此只限于分析气体和沸点较低的化合物及相对分子质量小于400的非离子型化合物； 高效液相色谱法对试样的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，能分析相对分子质量大于400的有机化合物。 二、高效液相色谱与气相色谱的比较 圆汇驮贺斜狰拱翠础椭韵曳主学牢极臀侮议启链听帽洛吵瘸估渡渐皖滩房第17章 高效液相色谱第17章 高效液相色谱 气相色谱的流动相是惰性的载气，不参与分配过程，它与组分分子没有亲合作用，仅起运载的作用； 液相色谱中的流动相（载液）对组分分子有一定的亲合作用，与固定相争夺组分分子，因而增大了分离的选择性。 2.流动相不