XCL1基因论文猪XCL1基因原核表达多克隆抗体制备及产物活性鉴定.docVIP

XCL1基因论文：猪XCL1基因原核表达、多克隆抗体制备及产物活性鉴定 【中文摘要】趋化因子（chemokines, chemoattractant cytokines）是能够使细胞定向移动的小分子细胞因子,在促使细胞迁移和活化过程中发挥重要作用,对机体的免疫系统非常重要。淋巴细胞趋化因子（Lymphotactin,Lptn）是C族趋化因子的一员,也被称为淋巴趋化因子配体1（XCL1）。淋巴趋化因子受体XCR1与XCL1相互作用参与呈递抗原、激活T淋巴细胞和NK细胞,发挥机体的细胞免疫功能,能够调节免疫系统平衡,增强粘膜免疫、抗肿瘤免疫,在感染性疾病过程中诱发炎症反应等。柳超等已构建pEGFP-PLptn真核表达载体,证实绿色荧光融合蛋白在体外具有趋化活性,但并未进行进一步的研究。本研究首次构建了原核表达载体pET-32a-XCL1,摸索了原核表达的最佳诱导和纯化条件,采用HiTrapTM Chelating HP纯化蛋白,SDS检测重组蛋白纯化情况,Western-blot检测重组蛋白表达情况。并以此重组蛋白作为抗原,制备多克隆抗体,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响,为研究XCL1在猪中的功能提供了素材。主要研究内容与结果如下:1.根据NCBI上猪XCL1基因序列,设计引物,从猪淋巴结克隆得到0.27 kb的片段。