传染病实习报告.docVIP

实习报告 学 院: 动物医学院 课 程: 兽医传染病学实习 级: 动医班 号: 171102** 姓 名: ** 指导教师: 王先炜: 副教授 实习地点 逸夫楼4017 2013年6月 南京农业大学教务处制 实习报告 一、实习目的 以副猪嗜血杆菌病和蓝耳病为模型，学习传染病的临床诊断 通过对感染猪体内病毒和细菌的分离鉴定，学习掌握细菌性猪病、病毒性猪病的实验室诊断方法。 掌握畜禽传染病的临床诊断技术。 掌握畜禽传染病实验室诊断方案的设计、诊断试剂的准备和检测结果分析判定。 掌握畜禽细菌与病毒混合感染的病原分离与鉴定技术。 掌握细菌药敏试验指导畜禽临床用药。 实习安排 时间 地点 内容 一 5月2日 白天 逸夫楼4017 诊断试剂的配制； 器皿的准备以及灭菌的处理 二 5月2日 白天 逸夫楼4017 病料的采取与处理； 细菌的涂片检查与分离培养 三 5月2日 白天 逸夫楼4017 病毒的分离接种（病料过滤和接种细胞）；分离细菌镜检和增殖 四 5月日 晚上 逸夫楼4017 细菌的生化试验、药敏试验和细菌鉴定； 观察接种细胞 五 5月日 江浦农场 参观学习 六 月1 日 下午 逸夫楼4017 病毒细胞病变观察、菌落鉴定 实习内容 王先炜老师讲解本周传染病学实习的主要内容，传染病临床诊断的主要方法，实习过程中的注意事项实验器材的准备 实验准备 （一）灭菌消毒用品：手术刀片、手术刀柄、剪刀、大镊子、小镊子、剪刀、 黄色枪头一盒、用锡箔纸包好小滤器、玻璃匀浆器、1.5mL离心管、PCR管。 （二）其他用品：解剖盘、酒精灯、酒精棉球、解剖刀、记号笔、注射器、染色缸、乳胶手套、接种环、载玻片、细菌涂布棒、倒置显微镜等。 （三）试剂及配制 1.TSA平板（6块以上）成分： TSA：8g 琼脂粉：0.08g 去离子水 200mL 121℃， 15-20min， 冷却至50℃左右， 加入5mL的小牛血清，2.5mLNAD 2.TSB液体培养基（10管）成分： TSB：1.8g 去离子水：50ml 混匀后可分装小试管内（每管3mL） 121℃，15-20min 用之前每只试管加1μL血清，1μLNAD 血清：用前要灭能（56℃， 40min） 3.生理盐水：0.45g NaCI 加入50mL去离子水，然后高压灭菌 4.细胞维持液：在50ml的DMEM液中加入1ml的血清和1ml的双抗（青、 链霉素）(研究生配制）； 5.TE缓冲液（一起配置）： (10*TE buffer (100ml) 1M Tris-HCl buffer （PH=8） 10ml 500mM EDTA(PH=8) 2ml 定容至100ml，高压保存 (1M Tris-HCl （PH=8）（100ml） 12.11g Tris至80ml去离子水，加4.2ml浓HCl，定容至100ml，高压灭菌 (500mM EDTA（PH=8） 18.61g Na2EDTA?H2O至80ml去离子水，加2gNaOH，定容至100ml （四） 倒TSA平板 将TSA溶液高压后冷却至60℃左右，加入小牛血清和NAD。然后将平板边沿用酒精灯外焰灼烧消毒，将TSA溶液倒入平板中，均匀铺满整个平板，待其冷却凝固后，标记好班级，组名和时间等备用。 日期：2014.5.27 星期：星期二 细菌学检查和病毒学检查病料取样。 1． 细菌的分离培养 取病猪肺脏（冰冻组织需充分解冻），用酒精棉球点燃消毒肺脏表面，无菌手术刀切口，将接种环伸入于肺脏肺泡内，无菌划线接种TSA平板。具体操作如下： 右手执笔式持接种环，在酒精灯火焰上灼烧接种环，待冷； 左手抓紧琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬起一些，进行接种。或者，将平皿盖放在试验台上，尽量直立平皿靠近酒精灯火焰； 右手接种环在琼脂的一端涂布，划线时，接种环与琼脂表面是30°-40°的角度轻轻接触，利用腕力动作，切忌划破琼脂表面； 接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号笔注明接种时间，接种者等，然后将平皿的底朝上，放置在37°温箱内培养24-48小时（培养后可出现多种菌落，注意区分