第三章生物细胞培养基灭菌设备技术总结.pptVIP

发酵机械与设备 徐 明 芳 博 士 教 授 暨 南 大 学 生 科 院 2015-09-25 目录 绪论 第一篇 生物质原料处理设备 第二篇 生物反应设备 第三篇 产物分离设备 第四篇 其他设备 第一篇 生物质原料处理设备 第一章 生物质原料预处理设备 第二章 生物细胞培养基制备设备 第三章 生物培养基灭菌设备 本章内容 第一节培养基湿热灭菌的原理 第二节常用的灭菌设备 第三节常用的连续灭菌流程 第四节发酵罐实罐灭菌操作要点 培养基制备工艺过程： 原 料 → 筛 选 → 粉 碎 → 糊 化（蒸煮、酶） → → 糖 化（酶法）→ 灭 菌 → 冷 却 思考题 1.工业上防止杂菌污染的措施有哪些？ 2.如何计算灭菌时间？ 3.某发酵罐内装40m3培养基，采用连续灭菌，灭菌温度为1310C，原污染程度为每1ml含有2×105个杂菌，已知1310C时灭菌速度常数为15min-1，求灭菌所需的维持时间。 4、板式换热器的结构域工作原理 5、喷淋冷却连续灭菌主要设备与灭菌流程 6、喷射加热连续灭菌主要设备与灭菌流程 7、薄板式换热器连续灭菌主要设备与灭菌流程 8、某发酵罐内装培养基50m3,在121℃下进行分批灭菌，设每毫升培养基中含耐热的芽孢为107个，求理论灭菌时间？（分批灭菌的灭菌常数 lgk=-14889/T + 38.127） 9、发酵罐实罐灭菌操作要点？ 10、发酵罐的灭菌操作步骤 第一节培养基湿热灭菌的原理 1、概述：染菌的危害 2、生物工程工业上防止杂菌污染的措施 3、实验室灭菌的常规设备 4、湿热灭菌原理与计算 灭菌的定义 定义：是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。 工业规模的液体培养基灭菌主要是杀灭杂菌。 灭菌与消毒的区别： 灭菌 是用物理或化学方法杀死或除去环境中所有 微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 2、生物工程工业上防止杂菌污染的措施 1）使用的培养基和设备须经灭菌； 2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； 3）设备应严密，生物反应器维持正压环境； 4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； 5）使用无污染的纯粹种子。 培养基灭菌的目的和要求 目的：杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 要求： 达到要求的无菌程度(杂菌污染降低到被处理的每1000罐中只残留1个活菌的程度,10-3个/罐）； 尽量减少营养成分的破坏。 3、实验室灭菌的常规设备 化学法 化学药品灭菌法：甲醛、苯酚等 物理法 干热灭菌法 湿热灭菌法（生物工程工业常用方法） 射线灭菌法 湿热灭菌时间的计算 将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数N（10-3），需要多高的温度、多长的时间为合理。 灭菌温度和时间的确定取决于： 杂菌孢子的热灭死动力学 反应器的形式和操作方式 培养基中有效成分受热破坏的可接受范围 灭菌时间的估算 升温、冷却两阶段也有一定的灭菌效果，考虑到灭菌的可靠性主要在保温阶段进行，故可以简单地利用式 ㏑(N/N0) =-kt 来粗略估算灭菌所需时间。 灭菌时间的估算 例1：有一发酵罐内装40m3培养基，在1210C温度下实罐灭菌，原污染程度为每1ml有2×105个耐热细菌芽孢，已知1210C时灭菌速度常数k=1.8min-1，求灭菌失败机率为0.001时所需时间。 解：N0=40×106×2×105=8×1012(个) Nt=0.001(个) k=1.8(min-1) ㏑(Nt/N0)=-kt t=2.303/k[lg(N0/Nt)]=2.303/1.8[lg(8×1015)] =20.34(min) 由于升温阶段就有部分菌被杀灭，特别是当培 养基加热至1000C以上，这个作用较为显著， 故实际保温阶段时间比计算值要短。 第二节常用的灭菌设备 1、板式换热器灭菌 2、管道式换热器灭菌 一、板式换热器灭菌 采用薄板换热器作为培养液的加热和冷却器，培养液在设备中同时完成预热、灭菌及冷却过程，蒸汽加热段使培养液的温度升高，经维持段保温一段时间，然后在薄板换热器的另一段冷却， 从而使培养基的预热、加热灭菌及冷却过程可在同一设备内完成。 板式换热器 一、板式换热器的应用与结构 板式换热器的特点 第三节常用的连续灭菌机与流程 即在培养基输送至发酵罐的同时进行加热、保温和冷却而进行的灭菌。 三类连续灭菌（连消） 工艺流程 1.喷淋