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K5500微量分光光度计K5500 Micro-Spectrophotometer 分光光度法的定义与应用 定义: 分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的分析检测技术。 特点: 灵敏、精确、快速和简便，在复杂组分系统中，不需要分离，即能检测出其中所含的极少量物质。 应用: 生物化学研究中广泛使用的方法之一，广泛用于糖，蛋白质，核酸，酶等的快速定量检测。 分光光度计的分类 分光光度计的光谱范围 氙气闪光灯的发射光谱：氙灯能发出200～850 nm波长的光谱，可作为紫外-可见光光度计的光源。电源体积较小，采用脉冲闪光方式工作，闪光次数可达109次，寿命相对氘灯和钨灯较长。 物质的吸收光谱 物质的吸收光谱 原理 分光光度计进行样品浓度测定的原理是根据朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律, A = ε b c 其中，A ——为物质的吸光度； ε——为物质的吸光系数； b——为光路长度（光程）； c——为物质的浓度。 吸光度与浓度之间的关系 分光光度计的基本结构 K5500微量分光光度计是一款新型全波长（200～850nm）微量分光光度计，可用来检测核酸(A260nm)、蛋白质(A280nm, 以及试剂盒法)、细胞溶液、微阵列（基因芯片，同时检测核酸(或蛋白)和荧光染料）样品以及可以进行常规紫外-可见（ 200～850nm ）全波长扫描等。 仪器特点 样品用量少（1～2μL）！ 无需比色皿！ 紫外-可见全波长扫描（200～850nm）！ 无需预热，可随时检测！ 检测速度快！ 直接显示浓度值！ 样品无需稀释，可测样品的浓度范围是常规紫外-可见分光光度计的50倍！ 数据统计软件方便容易掌握！ 与传统分光光度计的区别与优势 与传统分光光度计的区别与优势 性能指标 样品体积要求：1～2μL 波长范围：200～850nm 波长精度：1nm 波长分辨率：3nm (FWHM at Hg 546nm) 吸光率精确度：0.003 Abs 吸光率准确度：1% (0.76吸光率在350nm) 吸光率范围：0.02～75（等效于10mm） 仪器外形尺寸：21cm×17cm×11cm 仪器重量：1.35kg 测量 在测量类型选项区选择正确的测量类型。 测量样品之前，要先做空白对照。 空白对照 （1）打开取样臂，用移液枪吸取1～2μL样品溶剂滴加 到检测平台上。 （2）合上取样臂，液柱会在上下基座之间自动形成。 （3）点击测量功能区的“Blank”按钮，软件会对溶剂自动进行测量，并自动记录空白值。 （4）打开取样臂，用干净的吸水纸将上下基座上的空白对照溶剂擦干净。 样品测量 （1） 以移液枪吸取样品（1～2μL）滴加到检测平台上。 （2 ）放下取样臂。 （3） 点击软件界面上的“Measure”按钮，即可得出样品参数（吸光度和浓度）和图表。 （4 ）以干净的吸水纸擦去上下检测平台上的空白对照用溶剂。 （5） 如需保存图表，可点击“Save Graph”按钮。 （6 ）待全部样品测定结束后，点击“Show Report”按钮，已测样品的测定数据将出现在Excel表格中。 仪器应用范围 K5500型微量分光光度计可用于测量： 核酸：核酸样品的浓度和纯度，包括双链DNA，单链DNA和RNA。 蛋白质：①A280测蛋白质样品浓度，包括1Abs = 1mg/mL，BSA，IgG，Lysozyme；②试剂盒法（Lowry法、BCA法、Bradford法）测定蛋白质浓度，软件自动绘制标准曲线，直接给出浓度值。 常规紫外/可见全波长扫描：可进行紫外/可见全波长（200～850nm）扫描。 细胞溶液：细胞溶液密度的测定。 微阵列样品：可同时检测核酸及染料浓度，且软件直接给出浓度值。 测量界面及吸收光谱特征 数据输出表格 * * 分光光度计的分类 紫外分光光度计: 可见分光光度计: 红外分光光度计: 测定波长范围为200～380 nm的紫外光区 测定波长范围为380~780 nm的可见光区 测定波长范围为大于780 nm的红外光区 包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。 钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～820nm波长的光谱，光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光