核酸的结构ppt.pptVIP

定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 Chargaff规则： （1）A=T （2）G=C （3）A+C=G+T （4）A+G=C+T 核小体由DNA链连在一起形成念珠状结构 DNA的功能 核糖核苷酸通过 3，，5，-磷酸二酯键相连形成长链 由70~90个核苷酸组成 含 10~20% 稀有碱基 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 具有 T?C （二）tRNA的二级结构—三叶草型模型 ①5′末端帽子结构：m7GpppN ②3′末端有多聚腺苷酸尾巴结构(polyA) ③单顺反子（一条mRNA链上有一个编码区） 酸、碱、酶水解 水解位点在磷酸二酯键和糖苷键 DNA/RNA对酸/碱的耐受程度有差别 碱性条件下，RNA可被稀碱水解；而DNA变性，但不被水解；可用此法测定RNA的碱基组成或去除RNA杂质 酸性条件下，糖苷键不稳定，嘌呤与脱氧核糖间的糖苷键最易被水解；故对核酸部分水解时，很少采用酸水解 具有芳香环结构特点，能发生酮式/烯醇式互变 碱基都具有弱碱性（主要是环内氨基的贡献） 碱基含有共轭双键，可强烈吸收250~290nm处的紫外光，最大吸收峰260nm左右 核酸紫外吸收性质的应用 可利用紫外光照相来定位测定核酸在细胞和组织中的分布 每摩尔碱基在一定PH下的紫外吸收值为定值，故利用此性质可定量碱基或碱基衍生物在纯溶液中的含量 利用碱基的紫外吸收性质可确定其在色谱和电泳谱上的位置 载体（浅蓝色荧光）， 核酸区（暗区） DNA变性 完全变性后核酸紫外吸收值增加： 天然DNA 25－40%、RNA 约1.1% 实质：碱基暴露 1. 解链曲线：如果在连续加热DNA稀盐溶液的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线。 探针 探针技术：在核酸杂交的基础上发展起来的一种用于研究和诊断的新技术。 探针(probe)：经同位素或荧光标记的具有特定碱基序列的单链核苷酸聚合体。 探针可用于：基因诊断、致病基因的定位、Southern blotting、Northern blotting、原位杂交、DNA芯片技术等临床实践和科研。 原位杂交法筛选DNA重组体图解 Southern印迹法 DNA芯片工作示意图 本 章 小 结 核酸是遗传物质载体的证明和研究历史 核酸的化学结构：戊糖、碱基（A、T、G、C、U），核苷、核苷酸及其衍生物的结构特点（原子编号） DNA的结构：一级结构（核酸序列及其表示、基因及基因组）、二级结构（ 双螺旋模型、Z－DNA等）、三级结构（超螺旋、核小体）、结构维持的化学键 RNA结构与功能：碱基组成特点、RNA的种类结构及功能 核酸的性质：酸碱性、变性与复性、分子杂交 影响核酸变性的因素： 过量酸，碱，加热（一般＞75℃）， 变性试剂如尿素、酰胺， 某些有机溶剂（如乙醇、丙酮等） 变性后理化性质的改变： OD260增高、粘度下降、比旋度下降、 浮力密度升高、酸碱滴定曲线改变、 生物活性丧失 RNA变性：从螺旋到线团之间的转变 RNA的变性引起的性质变化没有DNA明显 核酸变性引起紫外吸收值的增加-增色效应 DNA的紫外吸收光谱 由于变性或降解引起核酸紫外吸收增加的现象称增色效应 OD260 : 单核苷酸单链DNA双链DNA （二）核酸的热变性及Tm 变性过程是“跃变式”的，而非渐变 2. Tm：变性是在一个相当窄的温度范围内完成，在这一范围内，紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称熔解温度(melting temperature, Tm)。其大小与G+C含量成正比。 双链RNA比双链DNA稳定，Tm高大约20 ?C 一般DNA Tm 值在85 - 90 ?C之间 3. 影响Tm的因素 G-C含量：G-C含量越高，Tm越高 经验公式:（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 溶液的离子浓度：浓度越低，Tm越低 离子溶液的PH PH大于11.3时，碱基不能形成氢键，DNA完全变性；PH小于5.0，DNA易脱嘌呤 变性剂：变性剂可破坏氢键，使Tm下降 五、DNA的复性 1. DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复，具有减色效应。 减色效应 DNA复性时，其紫外吸收降低 变性和复性是可逆的， 将热变性的DNA骤然冷却至