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第一章 绪论 1 生物工程下游技术概念：对于由生物界自然产生的或由微生物菌体发酵的、动植物细胞组织培养的、酶反应等各种生物工业生产过程获得的生物原料，经提取分离、加工并精制目的成分，最终使其成为产品的技术。 主要介绍生物技术产品的分离纯化的原理、方法、过程理论及其应用。 2 主要内容包括： 固液分离法、细胞破碎法、萃取分离法、双水相萃取、超临界萃取法、离子交换法、膜分离法、层析分离法、结晶法等等。 3 一般步骤与单元操作： 固液分离：絮凝，离心，过滤 细胞破碎技术：机械破碎（球磨、高压匀浆），化学破碎（溶菌酶）等 初步分离：用一定的手段将大体积、浓度小的物料显著缩小体积并提高纯度。 方法：沉淀（盐析法、有机溶剂沉淀、等电点、沉淀剂），吸附，膜分离技术 精制：利用各种方法将具有一定纯度的生物产品进一步纯化至高纯度状态。方法：各种层析技术，离子交换 成品制成：浓缩，结晶，干燥 4.方法选择的基本原则： ①尽可能简单、低耗、高效、快速②分离步骤尽可能少③避免相同原理的分离技术多次重复出现④尽量减少新化合物进入待分离的溶液A引起新的化学污染B蛋白质的变性失活⑤合理的分离步骤次序 5.下游加工过程的特点 ①需要实现目标产物的快速分离纯化②需要对原料液进行高度浓缩③需要借助新型的分离技术④需要除去有害人类健康的物质⑤需要采用利于保持目标产物产品质量的操作条件 第二章 发酵液的预处理和固液分离 1. 发酵液的预处理方法：①加热法②调节ph③凝聚和絮凝 2凝聚：在凝聚剂(如铝盐、铁盐、石灰等)作用下, 胶体脱稳并使粒子相互聚集成１mm大小凝聚体的过程。 机理：A、中和粒子表面电荷B、消除双电层结构 常用凝聚剂：硫酸铝 Al2(SO4)3?18H2O（明矾）；氯化铝 AlCl3?6H2O；三氯化铁 FeCl3； 硫酸亚铁 FeSO4·7H2O ；石灰；ZnSO4；MgCO3 絮凝：大分子聚电解质将胶体粒子交联成网状，形成絮凝团的过程机理：架桥作用 常用絮凝剂：人工合成有机高分子聚合物，如聚丙烯酰胺类衍生物、聚乙烯亚胺衍生物；聚丙烯酸类和聚苯乙烯类衍生物。 3高价无机离子的除去： Ca2+ ——草酸、草酸钠，→形成草酸钙沉淀； Mg2+——三聚磷酸钠，→形成三聚磷酸钠镁可溶性络合物； Fe2+ ——黄血盐，→普鲁士兰沉淀 4杂蛋白的除去：①沉淀法②变性法③吸附法 5常用固液分离法：过滤，离心，膜分离，双水相萃取，扩张床吸附 过滤：在一定的压力差下，利用多孔性介质截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法称为过滤。 设备：板框压滤机、真空转鼓过滤机 离心分离：借助于离心机旋转所产生的离心力的作用，促使不同大小，不同密度的粒子分离的技术。 离心机种类：碟片式离心机、管式离心机、倾析式离心机 第三章 细胞破碎 1细胞壁的组成和结构 细菌类：组成—肽聚糖（多糖、氨基酸）、脂类 结构—多层三维网状结构 细菌破碎的主要阻力来自于肽聚糖的网状结构，其网状结构的致密程度和强度取决于聚糖链上所存在的肽键的数量和交联程度。 酵母菌：组成—甘露聚醇、葡聚糖、蛋白质、脂类等 结构—三层三维网状结构 酵母细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 霉菌：组成—几丁质（N-乙酰葡聚糖胺的聚合物）、葡聚糖、蛋白质、脂类等 结构—四层三维网状结构 破碎阻力：由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 2 细胞的破碎方法 3高压匀浆法 ： 工作原理：利用高压使细胞悬浮液通过针形阀，由于突然减压和高速冲击撞击环使细胞破碎 适用范围 ： 酵母、大多数细菌细胞及植物细胞大规模处理料液细胞浓度可达到20%左右 不宜采用高压匀浆法：易造成堵塞的团状或丝状真菌，较小的革兰氏阳性菌，含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀） 4破碎率的测定 ： ①直接测定法：破碎前的细胞，可利用显微镜直接计数；破碎后可采用染色法把破碎的细胞与未破碎的细胞区别开来。 ②目的产物测定法：将破碎后的细胞悬浮液离心分离细胞碎片，测定上清液中目的产物含量或活性，并与100%破碎率的标准值比较，计算其破碎率。 ③导电率测定法：细胞破碎后，大量带电荷的内含物被释放到水相，使导电率上升。导电率随着破碎率的增加而呈线性增加。测定前制定标准曲线。 第四章 沉淀 1 盐析：在高浓度的中性盐存在下，蛋白质（酶）等生物大分子物质在水溶液中的溶解度降低，产生沉淀的过程。 盐析原理：①减弱静电斥力②去水化膜 盐析剂的选择：①盐析作用要强②盐析用盐需有较大的溶解度③盐析用盐必须是惰性的④来源丰富、经济 2 盐析的两种方法： ①Ks盐析法—在一定的PH和温度下改变离子强度（盐浓度）进行盐析 ②β盐析—在一定离子强度下仅改变PH和温度进行盐析 应