做好血液涂片和正确染色.docxVIP

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做好血液涂片和正确染色

玻片的清洁一般清洗法(1) 将玻片放入肥皂或洗衣粉水中煮沸20 分钟。(2) 用热水将肥皂和血膜等污物洗去,再用自来水反复冲洗,最后再用蒸馏水冲洗3 ~5 次。必要时再置95 %乙醇中浸泡1 小时,然后擦干或烘干备用。 新玻片常有游离碱质,因此应用清洁液或10 %盐酸浸泡24 小时,然后分别用自来水及蒸馏水彻底洗涤。油污载片清洗法(1) 清洗液甲液 10g/L 过锰酸钾水溶液 乙液 25g/L 草酸水溶液(2) 清洗方法 将用过的玻片投入甲液数小时,取出后再投入乙液数小时,然后用自来水和蒸馏水冲洗干净后再置95 %乙醇中,以毛巾擦干净即成。 久用后甲液可出现泥沙样沉淀,乙液有乳白色沉淀,可用棉花滤去再用,如乙液褪色应重新配置。血涂片制作取末梢血1 滴,置载玻片一端,取另一边缘光滑的推片,放在血滴前面慢慢后移, 接触血滴后稍停。血液即沿推片散开,将推片与载片保持30 ~45°角,向前平稳均匀推 动推片,载片上便留下一层薄血膜。血涂片制成后,立即在空气中挥动,使其迅速干 燥,以免血细胞变形。血膜干燥后,用铅笔在血膜的一侧写上病人姓名或编号。  推血片方式一张良好的血片,厚薄要适宜,头体尾要明显,细胞分布要均匀,膜的边缘要整 齐,并留有一定的空隙。涂片时,血滴愈大,角度愈大,推片速度愈快则血膜愈厚,反之血膜愈薄。太薄的 血膜片50 %的白细胞集中于边缘或尾部,不利于白细胞分类。如果血膜分布不匀,主 要是推片不整齐,用力不均匀,载片不清洁所致。(三) 染色瑞氏染色法 (Wright staining)本法的特点是将固定和染色合并在一起进行,手续简便,染色时间短,对白细胞中 的特异性颗粒着色较好,但对核的着色较差。(1) 原理 瑞氏染粉是由伊红和美蓝混合后组成的一种中性盐染料。伊红是一种酸性染料,为伊红钠盐,其有色部分为阴离子;美蓝是一种碱性染料,为氯化美蓝,有色基团为阳离 子。如以 M + 代表美蓝,以E - 代表伊红,其反应式为:M +Cl- +Na +E→ M E ↓+NaCl美蓝  伊红伊红化美蓝 ( 瑞 士 染 料 )将适量的 M E(瑞士染料) 溶解在甲醇中,即成为瑞氏染液。甲醇的作用可使 ME 溶解,解离为 M + 和E - ,这两种有色离子可以选择性地吸附血细胞内的不同成分而着色。甲醇(AR)的另一 个作用是有很强的脱水作用,可将细胞固定为一定形态,当细胞发生凝固时,蛋白质被 沉淀为颗粒状或者网状结构,增加细胞结构的表面积,提高对染料的吸附作用,增强染 色效果。细胞的着色过程是染料透入被染物并存留其内部的一种过程,此过程既有物理吸附 作用,又有化学亲和作用。各种细胞及细胞的各种成分由于其化学性质不同,对各种染 料的亲和力也不一样,因此,在血片上可以见到不同的着色。细胞中碱性物质与酸性染 料伊红结合染成红色,因此该物质又称为嗜酸性物质。如,红细胞中的血红蛋白,嗜酸 性粒细胞胞浆中的颗粒为碱性物质,这些物质可与伊红结合染成红色。细胞中的酸性物 质可与染液中的碱性染料美蓝结合染成蓝色,该物质又称嗜碱性物质,如:嗜碱性粒细 胞中的颗粒为酸性物质可与碱性染料美蓝结合染成蓝色。细胞核主要由脱氧核糖核酸和 强碱性的组蛋白、精蛋白等形式的核蛋白所组成,这种强碱性的物质与瑞氏染液中的酸 性染料伊红结合成红色,但因为核蛋白中还有少量的弱酸性物质,它们又与染料中的碱 性染料美蓝作用染成蓝色。但因含量太少,蓝色反应极弱,故核染色呈现紫红色。幼稚 红细胞的胞浆和细胞核的核仁中含有酸性物质,它们与染液中的碱性染料美蓝有亲和 力,故染成蓝色。当细胞含酸、碱性物质各半时,它们既与酸性染料作用,又与碱性染 料作用,染成红蓝色或灰红色,即所谓多嗜性。当胞浆中的酸性物质消失时,只与染液 中的伊红起作用,则染成红色,即所谓正色性。(2) 试剂①瑞氏染液瑞氏染料 (粉) 1.0g纯甲醇 (AR 级以上) 600.0 ml将全部染料放入乳钵内,先加少量甲醇慢慢地研磨 (至少半小时),以使染料充分 溶解,再加一些甲醇混匀,然后将溶解的部分倒人洁净的棕色瓶内,乳钵内剩余的未溶 解的染料,再加入少许甲醇细研,如此多次研磨,直至染料全部溶解,甲醇用完为止。 密闭保存。②磷酸盐缓冲液 (pH6.4 ~6.8)磷酸二氢钾 (K H2PO4) 0.3g磷酸氢二钠 (Na2 HPO4) 0.2g蒸馏水 加至1000.0ml配好后用磷酸盐溶液校正pH ,如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。(3) 操作①用蜡笔在血膜两头划线,以防染液溢出,然后将血膜平放在染色架上。②用瑞氏染液3 ~5 滴覆盖整个血膜,固定细胞0.5 ~1 分钟。③滴加等量或稍多的缓冲液,用吸球将其与染液吹匀,或者摇动玻片染色5 ~10 分钟。④慢慢摇动玻片,然后用流动水从玻片的一侧冲去染液,待血片自然干燥后 (或用滤纸吸

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