九龙江水大肠菌群的测定.docVIP

九龙江水大肠菌群的测定 摘要：本文依据统计学原理及大肠杆菌的特性来测定九龙江水中是否含有大肠杆菌，并测定其含量有多少。 关键词：大肠杆菌 发酵 革兰氏染色 The assay of the Jiulong River’s water’s Escherichia coli Abstract：According to the statistics’ principle and the characteristics of the Escherichia coli in different concentrations to assay whether the water of the Jiulong River has the Escherichia coli and how much they are. Key words: Escherichia coli; ferment; Gram stain 大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli） 革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。1mL、5mL）、量筒、玻棒、烧杯、培养皿、水浴锅（箱）、培养箱、显微镜、锥形瓶、接种环、干燥箱、汉德氏管、高压灭菌器、单道移液器、电子分析天平 1.1.2 培养基 乳糖胆盐蛋白胨培养基 伊红美蓝琼脂（EMB）培养基 3倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨液体培养基的配制 1.2.1 材料 乳糖 30g 蛋白胨 60g 0.04%溴甲酚紫水溶液 75mL 胆盐 15g 蒸馏水 1000mL 1.2.2 配制方法 将上述培养基成分加热溶解于1000mL蒸馏水中后，调pH7.2~7.4，加入0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，充分混匀，分装于置有杜汉氏小管的试管内。115℃灭菌15min。 1.3 伊红美蓝琼脂（EMB）培养基的配制 1.3.1 材料 伊红美蓝琼脂（EMB） 37g 1.3.2 配制方法 称取37g的EMB加1000ml的蒸馏水，加热溶解后分装于三角锥形瓶中，于LDZX-40B1不锈钢立式灭菌消毒器控制116℃灭菌20min。然后倒平板。 2 操作步骤 2.1 多管发酵（大肠菌群的测定） 2.1.1 水样的采集 用高温灭菌过的试剂瓶到九龙江取水，将瓶子连瓶盖一起伸到10-15厘米的深处打开瓶塞，等水满后盖上盖子后从水中取出。运送水样时应避免玻璃瓶摇动，水样溢出后又流回瓶中，从而增加污染。 2.1.2 水样的稀释 将灭菌的三根试管各装4.5mL的无菌水标上1、2、3的记号。充分振荡水样，从中吸取0.5mL于1号试管中，充分振荡即得1：1 0的稀释 液。同理配制1：100及1：1000稀释液。 2.1.3 初步发酵试验 在1个含有50ml 三倍浓缩的乳糖胆盐蛋白胨发酵烧瓶中，加入100ml 水样（轻度污染水的测定）。 在2支含有5ml 三倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，各加入10ml 水样（中、轻度污染水的测定各一支）。 从原水样、1:10、1:100、的稀释液各吸取0.5mL于4支经过灭菌的装有5mL普通浓度乳糖蛋白胨中。（每吸取一次，吸头都要换一次。）原水样，1:10重复一次（中、轻度污染水的测定各一支）。 将上述溶液混匀后，于36摄氏度培养24h，24h未产气的继续培养至48h。记录其稀释液的产气管数，进行复发酵试验。 2.2 平板分离 经24h 培养后，将产酸产气及48h 产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18-24h，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。 2.3 复发酵试验 经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖胆盐蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1-3个，37℃培养24h，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表，即得大肠菌群数。 3 革兰氏染色 3.1 实验器材 3.1.1 菌种 大肠杆菌24h~48h营养琼脂斜面培养物 3.1.2 染色剂 革兰氏染色液 3.1.3 仪器及其他用具 显微镜、酒