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第五章 扫描电镜生物样品制备技术 Features of SEM Features of SEM Features of SEM Features of SEM 清洗液的选择 一般组织：等渗生理盐水 游离组织细胞：缓冲液、等张液 表面覆有大量黏液的组织（如胃肠粘膜）：低浓度蛋白水解酶 组织培养细胞：组织培养液 特殊样品：特殊洗液（如生药表面的蜡质，选用去垢剂Triton X-100） 空气干燥法 方法：脱水至无水状态，为减缓其挥发速度，退回至85%脱水剂，取出，空气中自然干燥。 优点：脱水剂为低表面张力物质，挥发过程中减少了样品的收缩及损伤 缺点：常常使样品发生变形收缩 适用范围：铸型或体表比较坚硬的甲壳昆虫等含水量较少的样品 冷冻干燥法 方法：将含大量水分的生物样品迅速投入液氮中，使样品冷冻固化，而后将样品移入真空镀膜仪内，在高真空状态下升华，脱水剂直接由固态转为气态，样品随之得到干燥。 优点：不存在气相与液相间的表面张力问题，故对样品损伤较小。 缺点：需特殊的低温条件，易出现冰晶损伤，费时。 适用范围：含水量较多的生物样品 离子溅射法 原理： 利用气体在低真空中的辉光放电所产生的高能离子，对靶极产生撞击，从靶极上打出金属粒子，金属粒子在电场的作用下飞向样品。在到达样品前，金属粒子之间以及金属粒子与气体分子之间要发生相互撞击，改变了金属粒子飞向样品的方向，具有“绕射”效应，所以在样品表面能形成一层连续的、厚度均匀的金属膜。 离子溅射的优点： 要求的真空低 工作温度低 金属粒子无方向 连续的、厚度均匀 甲 虫 3kV 大肠杆菌 耳蜗 尿酸钠结晶 红细胞 巨噬细胞吞噬 上左：兔肾小体细胞 上右：血细胞发生 下图：十二指肠绒毛 SEM觀察苗木下表皮氣孔分佈及葉部組織之微細構造 A：氣孔密度(橫線=120mm) B：氣孔形態(橫線=12mm) C：葉組織(橫線=120mm) A B C SEM觀察泡桐根瘤線蟲微細構造 SEM觀察A. scrobiculata孢子之外觀形態 (橫線=60mm) SEM觀察G. mosseae丛枝菌根真菌 孢子之外觀形態 (橫線=100mm) 接種菌根菌及2%鹽分處理草海桐苗木之根部微細構造 (A：橫線=30mm；B：橫線=12mm) 未接種菌根菌草海桐苗木之根部微細構造 (A：橫線=300mm；B：橫線=12mm) T R R T T. harzianum (T)寄生在立枯絲核菌(R)菌株上的情形 松材線蟲頭部口針 松材線蟲(雄) 松材線蟲(雌) 白粉病分生孢子 麻竹墊銹菌孢子 第二节 扫描电镜特殊样品制备技术 特殊生物样品制备主要有： （1）管道铸型样品 （2）冷冻断裂样品 （3）游离细胞样品 （4）组织消化样品 1. 管道铸型样品 用于研究血管淋巴管胆管等空腔性脏器的立体结构关系和内表面结构。 铸型方法: 铸型剂灌入管腔 硬化成型后将组织腐蚀去掉 处理铸型进行观察 铸型处理：干燥 喷镀 观察 * * * 第一节 常规生物样品SEM制备技术 高分辨率 强立体感 广泛的放大倍率 应用范围广 生物、医学、动物、材料、 化学、物理、地质、冶金、矿物、污泥 (杆菌)、机械、电机及导电性样品如半导体电子材料等 材料学土聚水泥 制备扫描电镜样品的总要求 在不损伤样品原始结构状态的情况下，保证样品的体积和表面积不发生改变，充分暴露样品表面的微细结构 。 生物样品的特性 含水量高 质地柔软 导电性差 二次电子产率低 对热、电子束等敏感 扫描电镜生物样品要求： 不含水份 具有较高的二次电子发射率 良好的导电性 耐热性 最大限度的保持样品的形貌 扫描电镜样品常规制备的操作程序 1. 取 材 2. 清 洗 3. 固 定 4. 脱 水 5. 干 燥（置换） 6. 粘 托 7. 镀 膜（导电处理） 一、 取 材 要 点： 确定观察