12生物技术在园艺植物育种中的应用辩析.pptVIP

第十二章 生物技术在园艺植物育种中的应用 第一节 细胞和组织培养在植物育种中的应用 第二节 原生质体培养与体细胞杂交的意义 第三节 基因工程在植物育种中的应用 第四节 分子标记的特点 第十二章 生物技术在园艺植物育种中的应用 生物技术（biotechnology）又称生物工程 （bioengineering），是以生命科学为基础，利用生物体的特性和功能，设计、构建具有预期性状的新物种、新品种、新品系，以及与工程原理相结合，进行加工生产，为社会提供商品和服务的综合技术体系。 第十二章 生物技术在园艺植物育种中的应用 通常所说的细胞工程、基因工程、酶工程、发酵工程、生化工程和蛋白质工程等均属生物技术范畴。 本章主要介绍细胞和组织培养在园艺植物育种中的应用。并简介原生质体培养与体细胞杂交、基因工程和分子标记在育种中的意义。 第一节 细胞和组织培养在植物育种中的应用 广义的植物组织细胞培养（plant tissue or cell culture）是指将植物体的各种结构（外植体）放在离体的、无菌的人工环境中让其生长发育的方法。因此组织培养也叫离体培养（culture in vitro）。 一、离体培养技术的应用 1.花粉、花药、胚珠和子房培养 一、离体培养技术的应用 2.离体受精 一、离体培养技术的应用 2）花粉与卵细胞的体外受精 A、共培养法 先将花粉撒于一个适宜于花粉萌发的培养基上，再将胚珠置于撒播的花粉中间。 B、人工受精法 将花粉撒在离体的子房或胚珠上，让其受精。受精后的子房或胚珠继续培养可发育成成熟的种子。 一、离体培养技术的应用 3.离体胚的培养 植物的胚培养主要有两种培养方式： 1）以幼胚为外植体诱导愈伤组织細胞，通过器官发生或胚胎发生产生再生植株； 2）使发育完全的胚直接萌发，获得完整的植株。 离体胚培养在植物育种中的应用主要包括以下三个方面： 一、离体培养技术的应用 A、克服远缘杂交不育； B、促进核果类植物胚的形成； 核果类早熟品种的胚发育不健全、生活力不强，以早熟品种为母本与晚熟品种杂交，很难得到杂交后代。如果用幼胚离体培养就能得到杂交后代。 C、打破种子的休眠期。 许多植物的种子存在明显的休眠期。由于种子结构而存在的休眠可以用常规方法消除，而由于胚乳抑制物质所引起的休眠只能通过胚的离体培养才能获得理想的效果。 一、离体培养技术的应用 4.组织和器官培养 1）意义：优良单系的快速繁殖；自交不亲和系、雄性不育系的无性繁殖；无性繁殖园艺植物的脱毒与快繁；突变体的诱导与分离；进行种质资源长期保存和长距离运输。 2）组织和器官培养的生物学基础：细胞的全能性和植物的再生能力。 3）组织和器官培养的基本过程：外植体------脱分化-------再分化。 二、培养条件 1）无机成分 ①大量元素： N、P、K、C、H、O、Ca、S、Mg。 ②微量元素： Cu、B、Mn、Zn、Mo、Fe。 2）有机成分： ①糖类：蔗糖、葡萄糖。 ②维生素：VB1、VB6、肌醇。 ③氨基酸 ④碱基 ⑤生长调节剂 ⑥植物提取物 ⑦琼脂 二、培养条件 2.环境条件 1）光 ①光强：1000----10000Lx ②光照时数：9---16小时。 ③光质：日光灯。 2）温度：一般25°C 三、设施 1.准备室 2.培养基配制及消毒室。 三、设施 5.温室 四、基本设备 1.衡器与量具 2.玻璃器皿 3.显微镜、解剖镜 4.灭菌锅 5.超净工作台 6.培养架 7.空调 8.日光灯 五、组织培养的一般程序 第二节 原生质体培养与体细胞杂交的意义 植物原生质体培养：是指将植物细胞去壁后，放在无菌条件下，使其进一步生长发育的技术。 体细胞杂交：是在离体条件下将同一物种或不同物种的原生质体融合，培养并获得杂种细胞的再生植株。 第二节 原生质体培养与体细胞杂交的意义 Takebe（1971）首次利用烟草叶片分离原生质体，并培养获得再生植株，至今已有280余种植物原生质体再生植株问世。1972年Carlson获得第一株烟草体细胞杂种植株以来，原生质体融合技术在不断完善和发展。 原生质体融合克服了植物种属间生殖障碍，为新种质的创造提供了一条有效途径。 一、原生质体培养和体细胞杂交的步骤 1.原生质体分离 轻度干旱（或离心）处理造成质壁分离；利用果胶酶（纤维素酶、半纤维素酶、蜗牛酶）等酶解细胞壁；再利用离心沉淀法（漂浮法、洗滴法）等分离纯化原生质体；应用形态鉴定（活性染色、荧光染料活性染色）等方法测定活力。 2.原生质体培养 原生质体移植在培养基上1-3d再生新壁（体积增加，由圆形变为卵圆形）；新壁形成后，细胞分裂形成愈伤组织或胚状体，进一步培养和处理可发育成为完整植株。 一、原生质体培养和体细胞杂交的步骤 3.体细胞杂交 1）原生质体融合 主要方式有：PEG法、