切片制作技术专用课件.ppt

病理切片制作技术 第一章 组织的取材和固定方法 第二章 组织切片技术 第三章 苏木精-伊红染色方法 第一章 组织的取材和固定方法 病理标本的检查应包括大体和显微镜下观察二个方面，而正确的诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此，制片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。 近年来，免疫组织化学方法在病理学上应用越来越广泛，对取材的要求也越来越高，不仅要求组织细胞的形态保存完整，而且要求最大程度的保存组织或细胞成分的抗原性。抗原性不受损伤是一方面，还要求不能弥散，否则，对于抗原含量较少的标本，抗原性完全丧失，产生假阳性结果，影响病理诊断的准确性，甚至抗原的定位也无从谈起。 第一节 取材 从大体标本上按照病理检查的目的和要求切取适当大小的组织块，供制片进行显微镜检查。 一、取材时对送检组织的要求 二、取材 三、取材时的注意事项 四、冰冻切片取材 一、取材时对送检组织的要求 送检组织切取后应立即放入10%福尔马林溶液内固定； 尸检标本应争取在死亡后尽可能短的时间内取材； 有特殊要求（如细菌培养、结石的化学成分分析等）须事先联系，在标本未固定前进行处理。 二、取材 对送检组织应进行详细检查，根据诊断的需要，确定取材的部位和块数； 切取的组织要按不同部位分别给予不同的编号或标记，以便镜检时查对。 三、取材时的注意事项 1．注意防止人为损伤 切取组织的刀具应锋利、薄；切取组织块时，避免前后拉动或用力挤压组织，避免使用有齿镊，引起组织结构的变形和损伤。 2．标本大小 经修整后的组织大小以1.5 cm ? 1.5 cm ? 0.2-0.3 cm 为宜。 3．取材时间 原则上应尽快取材。 4．注意包埋方向 需指定包埋面的应作记号表明。如皮肤组织的包埋面应与表面垂直，才能保证皮肤的各层结构都能被观察到。 5．小标本的处理方法 较小的标本（如穿刺材料等）常常用易透水的薄纸包好，在取材时将标本染上伊红液，以免包埋过程中丢失。 6．注意特殊情况 取材应避免过多的坏死组织或凝血块，组织块上如有血液、粘液、粪便等污物，应先用水冲洗干净再取材。 7．取材数量 不同的标本取材的组织块多少不同，原则上是凡是可疑处均应取材。一般来讲，除了病变的主体部分外，应注意切取病变组织和正常组织交界处。 8．清除多余部分 取材时应注意清除组织周围的多余脂肪组织，否则会对以后的切片和观察带来一定的影响。 9．核对 取材完毕，应核对无误，并签署有关信息和记录日期。 10．组织存放 取材完毕，标本应按序存放，并加足固定液以备复查。 四、冰冻切片取材 （一）取材 ? 在详细检查的基础上选取最有代表性的组织，必要时应取2块或更多组织块。取材后应立即用液氮速冻，然后在-70℃或-40℃低温冰箱保存。 ? （二）注意事项 ? 1．液氮速冻时，标本盒不能直接浸入液氮，以免组织膨胀破碎。 2．新鲜组织不能放入-10℃冰箱内缓慢冷却，否则组织内水分可逐渐析出形成冰晶，造成组织结构破坏。 3．冷冻后的组织块应密封保存，防止脱水。 4．在组织块复温时，应在37℃加温速融，自然复温将造成组织结构破坏。 第二节 固定方法 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置，这一过程称为固定。凡需病理检验的各种组织都需经过固定。 一、固定的意义 二、固定方法的选择 三、固定液 一、固定的意义 1．保持细胞与生活时的形态相似，防止自溶与腐败。 2．保持细胞内的特殊成分与生活状态时相仿。经过固定，细胞内的一些蛋白质等可沉淀或凝固，使其定位在细胞内的原有部位，有利于其后物质的确切定位。 3．便于区别不同组织成分。组织细胞内的不同物质经固定后产生不同的折光率，对染料产生不同的亲和力，经染色后容易区别。 4．有利于切片。固定剂有硬化作用，可使细胞正常的半液体状胶体变为半固体状凝胶，使细胞组织硬度增加，便于制片。 固定剂对组织细胞的不利影响 1．影响常规染色。如用福尔马林固定时，常有福尔马林色素的异常沉积。 2．固定造成物质损失。不同的固定剂和固定方法会引起不同程度的细胞内蛋白质、粘多糖、脂类、核酸和低分子量物质的损失，因此应根据研究目的的不同选择适当的固定剂和固定方法，以使所研究的物质损失达到最小。 3．组织皱缩。甲醛、福尔马林固定的组织均有不同程度的皱缩。 二、固定方法的选择 （一）细胞内物质成分与固定剂的关系 （二）常用的固定方法 （三）固定时注意事项 （一）细胞内物质成分与固定剂的关系 组成细胞的主要成分是蛋白质、脂类和糖类，根据研究目的不同选用不同的固定剂和固定方法，如要保存细胞内糖原用Ca