宫颈病变程度与人类乳头瘤病毒(16.docVIP

宫颈病变程度与人类乳头瘤病毒（16、18型）负荷的关系 谢军花1 蔡 兰2 敖金娥3 邹先进4＊ 杨 婉5 湖北省荆门市第一人民医院病理科 ＊通信作者：邹先进 地址：湖北省荆门市象山大道67# 荆门市第一人民医院病理科（邮政编码：448000）。电话：0724-2305787，Email:xjz6074@ 人类乳头瘤病毒〈HPV〉的亚型，现在发现已有近100种，其中感染生殖道的HPV亚型有近30种，可分为低危组和高危组[1.2]。低危组主要是HPV6.11型，与尖锐湿疣有关；高危组主要是HPV16.18型，与官颈癌发生有密切关系。有文献报道宫颈鳞癌HPV感染可高达93—100%[3]本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（Fluorescence quantitative PCR,FQ—PCR）方法[4],检测不同宫颈病变组织感染HPV16.18型DNA拷贝数量,以探讨宫颈病变与HPV16.18型负荷的关系,为临床判断宫颈病变发展趋势,制定治疗方案和随诊计划提供依据。 材料和方法 1.标本来源：收集2002年8月-2002年11月,我院妇产科送检宫颈病变活检组织标本286份。另随机抽取1991年-2002年7月宫颈石蜡包埋标本:鳞状细胞癌215例，癌颈上皮内瘤变(Cervical intraepithelial neoplasias,CIN)64例,宫颈炎伴糜烂8例。正常宫颈组织33例（非宫颈病变手术切除标本），子宫内膜及肌壁蜡块31例。286份宫颈活检标本均做常规HE染色，作出病理诊断（阅片者不知FQ-PCRHPV16.18型DNA检测结果）。351例石蜡包埋标本，均调出原HE染色切片复习，将病理诊断结果分类为正常宫颈，宫颈糜烂（Ⅰ°.Ⅱ°.Ⅲ°），CIN (Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ 级)，宫颈鳞状细胞癌（角化型.非角化型.小细胞型）。 2.仪器：PE7700自动荧光PCR仪（ABI prism 7700 Sequence Detector, 美国Perkin Elmer公司）。 3.HPV16.18型荧光定量PCR检测试剂盒，购于中山医科大学达安基因有限公司。引物序列为：上游引物：5′-CCGGACAGAGCCATTACAA-3’，下游引物：5′-CGCACAACCGAAGCGTAGA-3’，荧光探针序列为：5′-ATTGTAACCTTTTGTTGCAAGTGTG-3’ 。 4．标本DNA提取：新鲜活检标本经10%甲醛固定过夜后，切取3-5mm3组织放入1.5ml无菌试管内。石蜡包埋标本切5μm厚切片5-8片放1.5ml无菌试管内，加入1ml二甲苯置37℃恒温箱内脱蜡3×30分钟，然后用无水乙醇，无菌生理盐水洗涤。所有标本均采用常规的碱裂解法提取HPV（16.18）型DNA。 5.FQ-PCRHPV16.18型扩增：各反应管放入PE7700自动荧光检测仪，按下列条件扩增：93℃2分钟预变性，然后按93℃45秒—55℃120秒，共做40个循环。反应结束后，由电脑自动分析计算出结果。 6.对照：FQ-PCR16.18型DNA检测时均做阳性和阴性对照。 7.统计学方法：采用SPSS统计软件处理，定量结果采用求算对数平均值的方法来计算HPV16.18型DNA平均拷贝数，阴性结果不参加平均值的统计。 结果 1.FQ-PCR检测HPV(16.18)型DNA结果见表1。在31例子宫肌壁及内膜标本中无一例HPV(16.18)型DNA阳性，假阳性率为0。正常宫颈33例，1例HPV（16.18）DNA阳性，阳性率3%。我们观察到，糜烂（Ⅰ°.Ⅱ°.Ⅲ°），CIN（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ级），鳞癌等组HPV(16.18)DNA阳性标本的定量平均值，有随着病变程度加重而逐渐增加的现象，经Kendall′s tau-b检验(Value=0.537)，P0.0001，差异有极显著性。 2.将宫颈不同病变之间感染HPV(16.18型)阳性结果进行相互比较（见表2），我们观察到正常宫颈上皮与CIN，与宫颈鳞癌HPV（16.18型）DNA阳性率相比较，差异有极显著性（P0.0001）。宫颈糜烂与CIN，CIN与宫颈癌HPV（16.18型）DNA阳性率相比较，差异有极显著性（P0.0001）。宫颈糜烂Ⅰ°，Ⅱ°，Ⅲ°HPV（16.18型）DNA阳性率相比较，差异有显著性(P0.05)，宫颈糜烂Ⅰ°与Ⅲ°HPV（16.18型）DNA阳性率相比较，差异有极显著性（P0.005），而宫颈糜烂Ⅱ°与Ⅲ°HPV（16.18型）DNA阳性率,差异无显著性(P0.05)。CINⅠ.Ⅱ.Ⅲ级,宫颈鳞癌角化型,非角化型及小细胞型相互之间HPV(16.18)DNA阳性率，差异无显著性（P0.05） 3.宫颈不同病变之间HPV（16.18型）DNA阳性标本平均定量值结果相互比较（见