小承气汤颗粒中的大黄素大黄酚含量测定.docVIP

小承气汤颗粒中大黄素、大黄酚含量测定实验设计方案 班级 药物制剂 学号 20105311047 姓名 邱超峰 1仪器与试药 仪器：高效液相色谱仪, 紫外检测器;电子分析天平;超声清洗机 对照品：大黄素, 大黄酚 试剂：甲醇、冰醋酸(分析纯) , 水(双蒸水) , 乙腈(色谱纯) 样品：阴性样品自制 2．方法与结果 2. 1色谱条件 色谱柱， 流动相: 乙腈-0. 5% 冰醋酸, 梯度变化见表1, A 相为乙腈, B 相为0. 5% 冰醋酸; 检测波长:270 nm; 流速: 1 mL /m in; 柱温: 25 ℃; 进样量: 20μL, 理论塔板数: 以每种标准品计算均大于5 000。 表1 梯度洗脱程序 时间 0 m in 3 m in 15m in 25m in 45 m in A /% 15 18 21 62 65 B /% 85 82 79 38 35 2. 2 供试品溶液的制备 称取样品颗粒约0. 5 g, 精密称定, 置具塞锥形瓶中, 加甲醇25 mL称重, 超声提取45m in, 放冷, 再称定重量, 以甲醇补足失重, 滤过。取续滤液5 mL用甲醇定容至10 mL即供试品溶液。另取缺大黄的阴性样品同法制成阴性对照液 2. 3 标准品溶液的制备 分别精密称取大黄素、大黄酚对照品0. 50，1. 61mg, 置10mL的量瓶中, 以甲醇溶解并定容, 即得各个标准品溶液。分别从以上2个标准品溶液中吸取1. 5，3mL置于25 mL的量瓶中并定容, 得混标溶液。 2. 4 线性关系的考察 精密吸取配好的混合标准品溶液0. 5、1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、8. 0 mL置10 mL的量瓶中, 以甲醇稀释至刻度, 取各浓度的混标溶液20 μL, 注入色谱仪, 按表1的梯度洗脱, 以各对照品面积A 对其浓度C( μg /mL)进行线性回归, 得回归方程。 2. 5 精密度试验 吸取混合对照品溶液, 按上述色谱条件连续重复测定5次, 进样量20 μL测得各对照品峰面积，验证仪器精密度。 2. 6 稳定性试验 取小承气汤样品按2. 2项下制备, 然后分别在0、2、4、6、8、10、24 h进行测定, 进样量20μL, 测得峰面积并计算，观察其稳定性 2. 7 重复性试验 平行精密称取同一厂家的小承气汤样品6份, 每份约0. 5 g, 按2. 2 项下溶液制备方法处理, 依上述色谱条件进样20μL, 测定并计算含量。 2. 8 干扰试验 取阴性样品对照液, 按上述色谱条件测定, 观察色谱峰，有无干扰性 2. 9 加样回收率试验 精密称取已知此2种成分含量的小承气汤样品, 共5份, 每份约0. 25 g, 分别加入一定量的对照品, 按供试品溶液制备项下的方法进行 制备, 依上述色谱条件测定各成分的含量并计算回收率。 2. 10 样品测定 取所购买的8个小承气汤样品, 按2. 2项下的方法制备溶液, 依照表2的梯度洗脱方法进样20μL, 每个样品平行测定3次, 用标准曲线计算各成分含量, 求平均值及RSD 值。