探讨EGCG对人胃癌MGC803细胞株增殖的影响及其分子机制.docVIP

探讨EGCG对人胃癌MGC-803细胞株增殖的影响及其分子机制 【摘要】 目的 探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate，EGCG)对人胃癌MGC-803细胞株增殖的影响及其分子机制。 方法 采用MTT法测定EGCG对胃癌细胞增殖的抑制作用；运用免疫细胞化学和免疫印迹技术分别检测c-Myc和磷酸化Erk1/2蛋白表达改变。 结果 EGCG对MGC-803细胞增殖具有抑制作用，呈浓度依赖性。EGCG处理后免疫细胞化学检测c-Myc蛋白的表达下调，免疫印迹检测磷酸化Erk1/2蛋白表达下调。 结论 EGCG抑制MGC-803细胞增殖，呈浓度依赖性，其抑制肿瘤细胞增殖的效应与抑制Erk1/2蛋白磷酸化及下调c-Myc蛋白有关。 【关键词】 EGCG； 胃肿瘤； c-Myc； Erk1/2 【Abstract】 Objective To probe the effects of green tea extract epigallocatechin-3-gallate(EGCG) on proliferation of human gastric cancer cell line MGC-803 and its molecular mechanisms. Methods MTT assay was used to test the inhibitory effects of EGCG on proliferation in MGC-803 cells. Expression of c-Myc in MGC-803 cells was detected by immunocytochemistry.The expression of phosphorated Erk1/2 protein in MGC-803 cells was examined using Western blot analysis.Results MTT assay has shown that EGCG significantly inhibited proliferation of MGC-803 cells in a concentration dependent manner.Immunocytochemistry detected the expression down regulation of c-Myc protein analysis treated with EGCG for 48 hours in MGC-803 cells.Western blot analysis confirmed the expression of phosphorylated Erk1/2 protein significantly down regulated.Conclusion EGCG inhibits proliferation of MGC-803 cells in a concentration dependent manner and its mechanism associated with the down regulation of c-Myc and phosphorylated Erk1/2 proteins expression. 【Key words】 EGCG；gastric neoplasm；c-Myc；Erk1/2 近年来，研究开发天然植物药抗肿瘤已成为有前景的新领域，并取得了可喜成绩，如：羟基喜树碱、三尖杉酯碱等对肿瘤细胞有明显抑制作用，并已研制出用于临床的制剂［1，2］。茶是一种由山茶科植物的叶片经一定的工艺制作成的饮料。研究发现绿茶及其提取物具有清除氧自由基、抗氧化、抗突变、抗炎抗病毒和抑制肿瘤生长等众多功效［3～5］。流行病学调查表明常饮绿茶与肿瘤的低发生率有关［6］。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3- gallate，EGCG）是绿茶的主要成分之一。本试验观察EGCG对人低分化胃腺癌MGC-803细胞株生长的影响，初步探讨EGCG抑制胃癌细胞增殖的分子机制。 1 材料与方法 1.1 药品试剂 EGCG（Sigma公司产品，纯度95%）购自北京鼎国生物技术有限责任公司，EGCG用磷酸盐缓冲液溶解，配成5mg/ml，0.22μm微孔滤膜抽滤除菌，4℃保存；培养基RPMI－1640（Gibco公司产品）；小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）；c-Myc抗体、S-P试剂盒、DAB试剂盒均购自福州迈新公司（美国MAXIN公司产品）；Erk1/2抗体、磷酸化Erk1/2抗体购自基因公司（Santa Cruz公司产品）。