分子生物学在检验医学中的应用.ppt

分子生物学在检验医学中的应用 ?一、分子生物学在检验医学中的常用技术 1、? PCR技术 2、? RT-PCR技术 3、? RFLP 4、? SSCP 5、? MSP 6、? 测序 ?二、外源性疾病的检验与诊断： 1、? 细菌、支原体、衣原体、寄生虫、 病毒等 2、? SARS冠状病毒的分子生物学检测 ?二、内源性疾病的检验与诊断： 1、? 临床基因变异酶的分子性质研究 1）? 用PCR-SSCP技术发现我国第一例 LDH遗传变异病例 病 例 21岁男性： LDH：75 U/L (参考范围：110-240 U/L) 其余指标均正常 在三年的调查期间，LDH活力始终处于较低水平，在 48-85 U/L之间 经排除其它原因，如血中的抑制剂的存在、药物的影响等可能因素外，我们怀疑可能有遗传性的LDH变异。根据计算红细胞中H、M亚基的比值，初步断定为H亚基变异，采用合成的7对引物，分别扩增LDH基因中的7个外显子，然后用SSCP电泳法与正常人对照，发现变异发生在外显子4上，由此证明该病人的长期低酶活力是有基因变异引起的。 2n 2 3n 3 4n 4 5n 5 6n 6 2）LDH-A和LDH-B亚基遗传变异及  对检验结果的影响 基因变异可导致酶分子组成结构发生变化，对酶活力和酶的物理化学性质造成影响，可给临床医生造成诊断陷阱(pitfall)，因为在不同疾病状态下，从相关联的组织器官中释放出的酶与预期的不同，病人血清酶活力不能完全反映各种疾病的状态，容易造成误诊。 LDH-B基因变异类型 ?变异位置 DNA 氨基酸置换 影 响 ?B-6 AAA-GAA Lys-Gly 电荷变化 B-35 GCC-GAG Ala-Glu 辅酶结合 B-103 8bp重复 移码突变 B-131 AGT-CGT Ser-Arg 辅酶结合 B-139 丢失2 bp (TC) 移码突变 B-145 4bp重复 移码突变 B-147 TAT-TAG Tyr-Ter 无义突变 B-171 CGC-CCC Arg-Pro 基质结合 B-172 TTT-GTT Phe-Val 基质结合 B-173 CGC-CAC Arg-His P轴的安定性 B-176 ATG-TTG Met-Leu 分子稳定性 B-287 丢失1bp(C) 移码突变 B-320 GAT-GTT Asp-Val 电荷变化 ? 3)? CK变异的分子性质及对酶活力 的影响 病例 56岁妇女，胸痛一天后被送入急诊科 心电图和临床症状提示AMI 实验室检查： LDH 6900 U/L (200-400 U/L) LDH-1/LDH-2 1.72 CK 37 U/L (15-130 U/L) CK-MB 0 U/L RT-PCR结果 外显子2 残基54处 A – G GAC – GGC 天冬氨酸 – 甘氨酸