人免疫球蛋白GFc片段(Fcγ)酶联免疫分析.docVIP

人免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)酶联免疫分析盒使用说明书 – 100 ng/ml 最低检测限：0.39 ng/ml 特异性：本试剂盒可同时检测重组或天然的人Fcγ，且与其它相关蛋白无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中免疫球蛋白G Fc片段(Fcγ)含量。 说明 ? 试剂盒保存：-20（较长时间不用时）；2-8（频繁使用时）。 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被抗的微孔中依次加入、，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。 试剂盒组成 酶联板Assay plate )：一块标准Standard）：瓶稀释液Sample Diluent)：1×20ml/瓶 Diluent）：1×10ml/瓶辣根过氧化物酶亲和素?（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶l/瓶（1:100）。 辣根过氧化物酶亲和素l/瓶（1:100） 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 浓洗涤液Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液Stop Solution）：1×10ml/瓶（N H2SO4）。 标准规格酶标仪 高速离心机 电热恒温培养箱 干净的试管和Eppendof管 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。瓶，稀释液稀释100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56ng/ml，样品稀释液ng/ml，临用前15分钟内配制。 如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）100 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则： 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100ul），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul生物素标记抗体加990ul生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶亲和素辣根过氧化物酶亲和素辣根过氧化物酶亲和素辣根过氧化物酶亲和素?的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 操作步骤试剂或样品稀释时，混匀。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。待测样品孔ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀，37℃反应120分钟甩干每孔加100ul（取1ul生物素标记抗体加99ul生物素标记抗体稀释液37℃,60分钟。 温育60分钟后，甩干洗板3次350ul/每孔，甩干。 每孔加辣根过氧化物酶亲和素100ul，37，0分钟，甩干洗板5次，350ul/每孔，甩干。依序每孔加ul，37℃避光显色分钟依序每孔加溶液50ul，终止反应。用酶联仪在4nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）：每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加溶液及NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内。辣根过氧化物酶亲和素辣根过氧化物酶亲和素洗板方法手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。计算以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。 当混合蛋白，避免起泡乘以