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植物组织中还原糖含量的测定 应用化学1101 程志永 植物组织中还原糖含量的测定 程志永 （东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨，150000） 摘要：本实验以葡萄糖为标准，以3,5- 二硝基水杨酸(DNS)作显色剂，用分光光度法测定黄瓜中还原糖的含量。在碱性条件下，3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的3–氨基–5–硝基水杨酸，该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。 关键词：还原糖；分光光度法；3,5-二硝基水杨酸 中图分类号：Q5-33 文献标志码：A 引言 DNS 比色法的原理是：3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中被还原糖还原成氨基化合物，在沸水浴中显色时间5min，波长在540nm下有最大吸收峰。试验过程中的诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响。因此，我们对用3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎还原糖含量的反应条件进行了一系列的试验，试图摸索最佳的试验条件以保证试验的精确度，以期获得可靠的数据为黄瓜品质育种的实践提供参考。 1 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 供试药剂 3,5-二硝基水杨酸；蒸馏水；葡萄糖溶液。 1.1.2 供试植物材料 黄瓜0.96g 1.2 实验方法 1.2.1 葡萄糖标准曲线的制作 称取0.0502g葡萄糖，定容至500ml；吸取葡萄糖标准液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL试管中，编号1、2、3、4、5、6，各加蒸馏水使体积为1.0mL，再加苯酚试液0.51mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸2.5 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热约15min，取出后冷却至室温。以一号试管为对照组。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。 管号 还原糖待测液（mL） 蒸馏水（mL） DNS(mL) 1 2.0 0.0 1.5 2 2.0 0.0 1.5 3 2.0 0.0 1.5 0 0.0 2.0 1.5 2.2 还原糖含量测定 通过对黄瓜中还原糖含量的测定，得出结果如表 2 表 2 黄瓜中还原糖含量 管号 1 2 3 吸光值A 0.407 0.403 0.386 平均吸光值A 0.399 还原糖含量（%） 1.7% 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。 [6] NAGIE N, IBSEN K, JENNINGS E. A process economic approach todevelopadilute-acidcellulosehydrolysisprocesstoproduceethanolfrombiomass[J].ApplBiochemBiotechnol,1999(77-79):599-607. [7] 大连轻工业学院, 等.食品分析[M]. 北京:中国轻工业出版社,1994:10. [8]MILLERGL.Useofdinitrosalicylicacidreagentfordeterminationofreducingsugar[J].AnalChem,1959,31(3):426-428.