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栽培黑麦Waxy基因的克隆及序列分析翻译文献
学号:2009010029
2013 届本科生毕业论文（设计）
题 目： 栽培黑麦Waxy基因的
克隆及序列分析
学院(系)： 农 学 院
专业年级： 农学09级
学生姓名： 夏元燕
指导教师： 陈其皎
合作指导教师：
完成日期： 二〇一三年六月
目 录
1 文献综述 1
1.1 栽培黑麦的应用价值 1
1.2黑麦基因资源在小麦育种中的研究现状及应用前景 2
1.3籽粒淀粉合成与Waxy蛋白的关系研究 3
1.4 Waxy蛋白研究状况 4
1.5 Waxy基因的研究状况 6
1.6 本实验的研究意义 7
2 栽培黑麦Waxy基因的克隆 9
2.1 材料与方法 9
2.1.1 试验材料 9
2.1.2试剂 9
2.1.3 仪器 9
2.2 试验方法 10
2.2.1 引物设计与合成 10
2.2.2黑麦基因组DNA的提取（微量CTAB法） 10
2.2.3目的基因的扩增 11
2.2.4目的片段的回收纯化 11
2.2.5 目的片段的连接与质粒转化 12
2.2.6 筛选阳性克隆 12
2.2.7 核酸及蛋白序列分析 13
3 结果与分析 14
3.1 目的基因的扩增 14
3.2 Waxy基因核酸序列分析 14
3.3 Waxy蛋白序列及结构分析 15
3.4 Waxy蛋白系统演化树的构建 16
4 总结与讨论 18
4.1实验总结 18
4.2 讨论 18
参考文献 19
附 录 21
致 谢 34
栽培黑麦Waxy基因的克隆及序列分析
作者：夏元燕 指导教师：陈其皎
摘 要：淀粉是自然界含量最为丰富的碳水化合物之一，也是禾谷类作物（小麦、大麦、玉米、水稻等）籽粒的主要能量储存物质。在控制植物直链淀粉合成中，颗粒结合型淀粉合成酶(Granule-bound starch synthase, GBSS) 起着至关重要的作用，该酶也叫Waxy蛋白，与淀粉粒特异性结合后，直链淀粉。当体内缺乏Waxy蛋白时，直链淀粉，是唯一适合做面包的谷类Motifscan在线预测，结果显示，Waxy蛋白的催化区由第78-339位共262个氨基酸残基组成，非催化区则分布在第379-516位氨基酸残基。余下的第71-77位和517-604位氨基酸残基分别组成了Waxy蛋白的C-端非催化区和N-端非催化区。
演化树的聚类分析表明，5条来源于黑麦的Waxy蛋白在氨基酸水平上与栽培大麦、野生二粒小麦和硬粒小麦遗传关系较为接近，与普通小麦、山羊草和大麦的遗传关系较远。
关键词：黑麦；Waxy基因；克隆；序列分析
CLONING AND SEQUENCE ANALYSIS OF
Waxy GENES FROM COMMON RYES
ABSTRACT: Starch is one of the most abundant carbohydrates in plant, it is also the main storage material in cereal crop such as wheat, rice, maize, barley, rye and so on. As the main component in the grains and flour of cereal crops, the composition of starch, namely the content of amylase and amylopectin, is the major factor that determines the processing quality and flavor of flour.
In the controlling of amylose biosynthesis, granule-bound starch synthase plays a key role. This enzyme is also called Waxy protein, encoded by Waxy gene. After specifically binds with starch granules, Waxy protein can keep amylose unbranched. So amylose synthesis would be hampered when there is a lack of Waxy
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