植株N测定方法.doc

二、植株全氮的测定（根据师兄经验加以改进的） 在农产品质量检测中，蛋白质的测定实际上也是通过对产品中全N的测定再进行换算的，小麦的换算系数为5左右。该方法测定出的蛋白质不包括氨基酸、酰胺等非蛋白质N，因此为粗蛋白。 该方法测定的N不包括硝态氮（NO2—1——N，NO3—1——N），因为NO3—在消煮过程中易挥发损失不还原成NH4+ 小麦籽粒N含量：2.2%-2.5%，茎秆为0.5%。植株的含N量约为0.3%-5%干物重。 （一）目的意义 1. 诊断作物营养水平，指导施肥。 2. 了解施肥效应和肥料利用率。 3. 用于农产品及饲料的品质鉴定。 （二）植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法） 1、方法原理 （1）H2SO4—H2O2消煮原理 植物样品在浓H2SO4溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易分解的有机物则分解，然后再加入H2O2 ，H2O2在热的浓H2SO4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H2SO4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，故可用同一消煮液分别测定N、P、K（植株中K以离子态存在）。 （2）蒸馏法原理 蒸馏过程的反应： （NH4)2SO4 + NaOH → Na2SO + 2NH3 + 2H2O NH3 + H2O → NH4OH NH4OH + H3BO3 → NH4·H2BO3 + H2O 滴定过程的反应： NH4·H2BO3 + H2SO4 → （NH4)2SO4 + 2H3BO3 2、主要仪器、试剂 （1）主要仪器：消煮管（用洗衣粉搓洗后，用蒸馏水洗）、螺口瓶、枪头、万分之一电子天平、电热板或普通电炉、定氮仪等。 （2） 需用的试剂： 1 浓H2SO4（化学纯是指满足一般生产或分析试验的试剂纯度，分析纯的纯度要比化学纯要高，一般应用于要求比较苛刻的场所化学纯、分析纯、色谱纯,是指试剂的纯度级别,化学纯是指一般化学试验用的，有较少的杂质，不妨您的实验要求。分析纯是指做分析测定用的试剂，杂质更少，不妨碍分析测定。色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。~0.5mm筛)0.3000g，置于消煮管，用少量水湿润样品（3-5ml），加浓硫酸5ml，摇匀（最好放置过夜），在电炉上先缓缓加热（250v ，30min），待浓硫酸分解冒白烟时逐渐升高温度（380V、1h），消煮至溶液呈均匀棕黑色时，（200V）稍冷后滴加H2O2至溶液变成乳白色，并不断摇动三角瓶。再加热（380v）30min，直至消煮液呈无色或清亮色后。 消煮液置于蒸馏管，并用少量水洗涤，每次3-5ml，总用量不超过20ml，加入40mlNAOH溶液（用3个小烧杯放置在旁边，差不多40ml就可以了），在螺口瓶中加20g·L-1硼酸—指示剂溶液，将螺口瓶置于定氮仪冷凝管末端，管口离硼酸液面以上3~4cm处，待馏出液体积约60ml时，蒸馏完毕。 （蒸馏过程中：1.首先可以自己先烧热水导入蒸馏瓶中，也可以打开蒸馏瓶出口，用电压进行烧煮，加样及NAOH时，1 先把电压关了，然后蒸馏口的夹子关了 2 打开加样口，将样品用蒸馏水洗入其中，记住加入NAOH ，用蒸馏水冲洗一下（这里不要关了加样口，暂不关）3 打开蒸馏瓶口，打开电压，然后再关闭加样口）4 拿螺口瓶接着 5 最后统一滴定。（每一个样品接受完，关掉电源，关掉蒸馏口、然后迅速将水放入出口，则通过倒吸，就洗干净，要放掉倒吸的水时，把加样口也打开，这样水放得快）。（三个蒸馏电压分别为40V、45V、52V） 滴定指示剂7-10滴左右，然后终点为酒红色。 4、结果计算 植株中N（%）=（V1-V0）×c×14× ts×10-3 ×100/m 式中： V1 ——样品测定所消耗标准酸ml数； V0 ——空白试验所消耗标准酸ml数； c——标准酸（H+1）的浓度mol·L-1；· 14 ——氮原子的摩尔质量（g·mol）； 10-3 ——ml换算为L； ts ——分取倍数；（定容体积/吸取液体体积） m ——干样品质量（g）。 100——换算成百分数 5、注意事项 （1）消煮开始时火要小； （2）加H2O2 时要等器皿少冷后，提起小漏斗，直接将H2O2 滴入溶液中； （3）消煮要彻底。消煮好的标志是：溶液呈无色或清亮色； （4）消煮液最后要赶尽H2O2 。否则会影响氮、磷的比色测定。方法是消煮液呈清亮色后再煮5-10分。也可观察液面的波动，赶尽H2O2后液面比较平静； 碱液要过量。要求中和完硫酸后再过量2ml； 蒸馏装置不