水质毒性分析的最新技术及应用.docVIP

水质毒性1生物毒性监测的必要性 随着近代工业的发展，，而且突发性环境污染事故时有发生，如人为投毒、自然灾害引起的水质突变，尤其是石油化工原料、产成品及有毒有害危险品的生产、储存和运输过程中发生的事故对环境水体所造成的污染等。这就要求我们要快速地应对各种突发性环境污染事故，尽量减少各种经济损失或社会影响。几十年来，各种理化分析手段的灵敏度越来越高，大多数研究者都是关注单一污染物对生物体和生态系统的毒性效应，但是，环境中的生物体常常暴露于多组分污染物共存的混合体系中，而非简单的单一体系。混合物体系产生的毒性效应是所有组分污染物拮抗、叠加、协同或抑制作用的综合结果，即使混合物体系中的单一组分处于无毒性效应浓度时，该组分对混合物的总毒性效应仍有一定的贡献【1-4】。因此，发展新的快速准确评价各类污染物毒性的有效方法显得非常迫切必要。环境中有毒物质生物毒性的测定与评价，一般用浮游生物、藻类和鱼类等水生生物，以其形态、运动性、生理代谢的变化或者死亡率做指标来评价环境污染物的毒性。这些方法一度成为评价环境污染的必需手段之一，但这些方法操作都比较繁琐，检测时间较长，检测费用较高，且结果不稳定，重复性差，使其难以推广应用，且不适于常规的检验，尤其是现场的应急监测。针对传统生物毒性检测方法的不足，以及现场应急监测的需求，一些快速、简便且经济的现代检测方法逐步发展起来，如发光细菌毒性检测方法、化学发光毒性检测方法等。其中发光细菌因其独特的生理特性，与现代光电检测手段完美匹配的特点而备受关注化学发光毒性监测方法则是毒性评价技术，在第一时间内对突发性事件或人为破坏引起的水源地及饮用水污染事件做出评估 FMNH2 +O2 + R-CHO → FMN + R-COOH + H2O + Light 概括地说，就是细菌生物发光反应是由分子氧作用，细胞内荧光酶催化，将还原态的黄素单核苷酸（FMNH2）及长链脂肪醛氧化为FMN及长链脂肪酸，同时释放出最大发光强度在490nm左右的蓝绿光【6】。 目前，发光细菌法已经成为了成为一种简单、快速的生物毒性检测手段，广泛应用于质检、环境监测、水产养殖等领域，并被列入了国际标准ISO11348，我国国家标准GB/T15441-1995，德国国家标准DIN38412。在我国，目前主要是以国际ISO标准和我国的国家标准为依据，尤其是国际ISO标准。 ISO11348标准的检测原理是，在15℃温度下，以无毒参比溶液做对比，样品或其稀释溶液与Vibrio Fischeri（费氏弧菌）接触15min或30min或5min后，测量出实际样品对发光细菌的抑制率。水质的毒性水平以LID值（当抑制率降低到20%时样品的稀释倍数）、EC20或EC50值（造成20%或50%抑制率时样品的浓度）表示。LID值越高，EC值越低，表明样品的毒性越强。而我国的国家标准GB/T15441-1995采用的菌种是明亮发光杆菌T3小种，水质的毒性水平是以相当的氯化汞浓度或选用EC50值来表征。 2.2 细菌发光法生物毒性仪目前国内常用的3种发光细菌为：明亮发光杆菌、费氏弧菌、青海弧菌。其中明亮发光杆菌在GB/T15441-1995所使用；费氏弧菌在的标准中所使用属淡水菌，在青海湖的鱼体内提取的菌种，确定单位样品中活性生物的数量 虽然细菌发光法的现场水质综合毒性分析技术在环境监测中应用很广泛，但是该法所需的发光细菌试剂需要在-18~-20℃的条件下保存，且其复苏温度也要在3~8℃毒性评价技术根据化学反应产生的辐射光的强度来确定反应中相应物质含量的分析方法，具有灵敏度高、设备简单、分析速度快、线性范围宽等特点。军方研发，被美国和英国的军方广泛采用。基于这一方法在军方的成功运用，美国开始在环保署、城市应急中心、水务公司、市政供水公司等领域推广采用。正是基于优势，美国公司研制并成功开发了一款现场水质生物毒性测试仪器USEPA环境技术认证项目（ETV），同时该便携式水质毒性分析仪美国环保署(USEPA) 在紧急响应草案中推荐的水质分析仪器。 在辣根过氧化酶的催化下发光试剂与氧化物发生化学反应，在反应过程中会发生闪光（化学发光）当样品中存在有毒物质时，便会影响该反应的进行，进而影响发光强度，通过发光强度的变化即可确定样品毒性强度。与细菌发光法相比，学发光法具有：测试速度快，5分钟之内就可以得到第一个测量结果，而传统的发光细菌法则至少需要15分钟；在常温下即可进行分析，；试剂可在常温下保存试剂稳定，测试方便数据重复性好，。发光细菌试剂需要在-18~-20℃的条件下保存，且其复苏温度也要在3~8℃性环境污染事故Backhaus T, Scholze M, Grimme L H. The single substance and mixture toxicity of quino