光合细菌的分离及培养条件研究.docVIP

光合细菌M-01的分离及培养条件研究 [摘要]从湛江市霞山区海滩表层污泥中富集分离出红假单胞菌属光合细菌M-01,对其培养条件进行了初 步探讨,结果表明:菌株生长温度为30e时,最适培养光照度为3 000 lx。培养基正交试验结果表明其最优 培养基配方为:氯化铵2 g,磷酸氢二钾0.2 g,乙酸钠4 g,碳酸氢钠2 g,氯化钠1 g,酵母膏0.15 g,硫酸镁 0.2 g,T.M储液少量,蒸馏水1 000 mL;其中乙酸钠为最大影响因子。 [关键词]光合细菌(PSB);分离;培养;正交试验 光合细菌(Photosynthetic bacteria)是一类光合自养型古老细菌,具有较强的分解有机物特性,光合 细菌作为水质净化剂广泛应用于水产动物如一些经济鱼类、虾蟹、贝类的养殖和育苗中[1~4]。在生产上有 意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[4]。现已有学者对红假单胞菌的分离、鉴定、培 养特性及保藏做了研究[5~7],但还没有关于其营养条件优化的报道。笔者从海洋环境中分离到了光合细 菌M-01,采用正交试验方法进行了培养条件优化的研究。现将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 (1)待分离材料 取广东省湛江市霞山区海滩表层污泥。 (2)培养基 使用红螺菌科富集培养基作为富集分离基础培养基[8]。 1.2 方法 (1)菌株的分离筛选方法 取污泥10 g,装入500 mL细口无色玻璃瓶中,加入富集培养液至满,盖上 瓶盖,隔绝空气,于30e, 3 000 lx光照下进行富集培养3~4 d,培养液呈绛红色后,取富集培养菌液1 mL,转接入培养液中,重复以上操作2次,然后采用改良的Hungate厌氧培养技术)))柱滚管法[9]进行 分离纯化,用分离培养基的琼脂柱穿刺培养后保存。 (2)细胞色素光谱吸收峰值测定方法 培养物离心后洗涤,将细胞悬浮于60%的蔗糖溶液中,采用 722S分光光度计扫描,波长范围为340~1 000 nm。 (3)生长量的测定 为比较不同培养条件下(光照、接种量、营养条件)培养物生长量的差别,采用 722S分光光度计检测培养物D660 nm值。 (4)光照度对菌株生长影响的测定 将已接种的光合细菌培养液于温度30e,光照度分别为2 000、 3 000、4 000、5 000、6 000 lx下培养3 d,每组3管,用722S分光光度计测定培养物菌液光密度D660 nm(用 培养初刚接种的培养液为空白对照)。 (5)酵母膏添加量对菌株生长影响的测定 在培养液中分别加入酵母膏,令其质量分数分别为0100、 0105、0110、0115、0120、0125、0130 g/L。 (6)培养基正交试验 根据预备试验,设计5因子4水平的正交试验(表1),在温度30e,3 000 lx光 照条件下进行培养基的正交试验。 #72# 长江大学学报(自科版)2005年8月第2卷第8期/农学卷第25卷第3期 Journal of Yangtze University Table1 Factor levels of orthogonal experiment of the culture mediag/L 水平A 氯化铵 B 磷酸氢二钾 C 乙酸钠 D 碳酸氢钠 E 酵母膏 1 015 011 210 015 0105 2 110 012 310 110 0110 3 115 013 410 115 0115 4 210 014 510 210 0120 2 结果与分析 2.1 菌株形态特征及培养特征 共分离纯化菌株5株,记为M-01、M-02、M- 03、M-04、M-05,均为棕红色菌落,培养特征类 似,M-01株生长速度较快,以其做以下试验。 菌株M-01幼龄呈短杆状,不形成丝状体,细 胞大小(016~019)Lm@(112~210)Lm。芽生 分裂,分裂时产生哑铃状的菌体。鞭毛染色,可见 极生鞭毛。 在光照厌氧液体培养中繁殖速度快,培养液 起初呈浑浊状,淡黄色,后来逐渐出现絮状物,转变为浅红色,最后呈深红色。在琼脂平板上菌落呈圆形, 边缘整齐,表面凸起,光滑湿润,棕红色。 2.2 菌株的最大吸收波长 图1为光合细菌活细胞的吸收光谱。由图1可见,活细胞的吸收峰位于380、500、535、590、805、860 nm等处,最大吸收波长为380 nm。光合细菌在380、805、860 nm处具有吸收,表明光合细菌含有细菌叶 绿素a,在500、590、535 nm处具有吸收,表明光合细菌的活细胞中还含有类胡萝卜素[10]。活细胞吸收峰 值表明M-01具有光合细菌典型吸收特征。 图1 光合细菌活细胞吸收光谱 Figure1 The optical density of M-01living cells 2.3