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植物细胞骨架-实验课件讲解
Your company slogan LOGO 植物细胞骨架的光学显微镜观察 实验目的 实验原理 实验用品 实验方法步骤 实验结果与分析 作业 细胞生物学实验课件 一、实验目的 掌握考马斯亮蓝R250?对植物细胞骨架染色的方法。 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 二、实验原理 细胞骨架(cytoskeleton)，是细胞内以蛋白质纤维为主要成分的网络结构，根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中等纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。 本试验采用去垢剂TritonX-100?的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。 三、实验用品 材料：洋葱 器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯 1. 磷酸缓冲液（10XPBS） NaCl 80g Na2HPO4·2H2O 0.6g KCl 4g KH2PO4 0.6g 蒸馏水 1000mL 试剂 试剂 2. M-缓冲液 ： 50mmolL-1 (PH?6.7)咪唑、50 mmolL-1 KCl? 0.5 mmolL-1 MgC12、1 mmolL-1 ?EGTA? 0.1 mmolL-1 EDTA、?1 mmolL-1巯基乙醇 4 mmolL-1甘油、pH：7.2。 ?? 3. 1%Triton-X100:用M-缓冲液配制。 4. 3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲液配制。 5. 0.2%考马斯亮蓝R250?染液： 0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、 7ml冰醋酸?、46.5ml蒸馏水。 四、实验方法步骤 1.撕取洋葱鳞茎内表皮1cm2若干片，置于小烧杯中。 2.用磷酸盐缓冲液（pH6.8）提前浸泡2小时左右。 3.吸去磷酸缓冲液，用1% TritonX—100处理20分钟。抽提细胞骨架以外的蛋白质，从而使骨架图像更加清晰。 4.吸去TritonX-100，用M—缓冲液洗3次，每次5分钟。M－缓冲液有稳定细胞骨架的作用。 5.用磷酸缓冲液（pH6.8）洗2次，每次10分钟。 6.考马斯亮蓝R250?染色30分钟。 7.蒸馏水洗2次。 9.置于载玻片上，盖上盖玻片，在光学显微镜下观察。 五、实验结果与分析： 绘出洋葱鳞叶内表皮细胞内细胞质骨架的分布图。 简述制备细胞骨架中使用磷酸盐缓冲液、M缓冲液、TritonX-100、考马斯亮蓝250 作用。 六、作业 1.对实验结果的分析，所观察到的细胞骨架是胞质骨架中的哪种类型，为什么？ 2.TritonX-100和M缓冲液的作用是什么？ 3.实验中的注意事项。 * * * * * * * * * * * Your company slogan LOGO * * * * * * * * * * *
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