燕窝中胶原蛋白的测定.docVIP

福建###########实践报告 燕窝中胶原蛋白的测定 专 业： 食品质量与安全 学 号： ********* 姓 名： ****** 实践课程： 科研实践 实践项目： 食品理化检验 实践单位： ******科研大楼 指导教师： ***** *** 实践单位 评分 实践报告 评分 总评分 2011 年 1月 15日 燕窝中胶原蛋白的测定 摘要:本文以燕窝皮为原料，采用木瓜蛋白酶酶解提取胶原蛋白。考察了底物浓度、酶浓度、酶解时间、pH, 温度等工艺条件对胶原蛋白提取率的影响。试验结果表明:木瓜蛋白酶添加量为1%,料液比为1:10,酶解时间8h,酶解温度为40℃时.最高提取率为11.01%. 关键词：燕窝、木瓜蛋白酶、胶原蛋白测定。 燕窝性平、味甘，人肺、胃二经，有补肺养阴、化痰止咳、润燥泽枯、补中益气的功效，主治肺痊、咳嗽、咯血、虚损、痰喘等症，是家喻户晓的药食两用高级滋补品。燕窝基原为雨燕科Apodidae金丝燕属Collocalia的几种鸟类唾液为主筑成的巢。[1]Ｘiangyi L-530HH-6数显恒温水浴锅上海洪富仪器仪表有限公司[2] 胶原蛋白在浓酸或浓碱的条件下，经过高温长时间水解，彻底变成游离的氨基酸。其中的羟脯氨酸首先用氯胺T氧化生成含吡咯环的物质，然后以高氯酸溶液除去剩余的氯胺一T，加入对——二甲基氨基苯甲醛溶液作为显色剂，生成红色化合物，用紫外可见分光光度计，在558am处测吸光值。从而可得羟脯氨酸的质量浓度。 1.3.2试剂的配制 0．75％溶液氯化亚锡：将氯化亚锡7．5g溶于500mL水中，再加入500ml浓盐酸： 12moUL盐酸溶液： lmol／L、10mol／L氢氧化钠溶液： 缓冲液：将50g柠檬酸，26_3g氢氧化钠和146．1g结晶乙酸钠fGB694)溶于水．稀至1L．此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。 氯胺T溶液：将1．41g氯胺T，溶于10mL水中，依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)； 显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35mL高氯酸溶解。缓慢加入65mL异丙醇； 500ug／mL羟脯氨酸标准储备液：称取50．0mgCL(一)-羟脯氨酸用少量水溶解，加一滴6moUL盐酸，定容至lOOmL容量瓶中： 5ug／mL羟脯氨酸标准工作液：吸取标准储备液5．0Oral于500mL容量瓶中，定容。 1．4试样处理 准确称取一定量样品，精确到0．0001g。使样品蛋白质含量在10-20mg范围内；将称好的样品放予水解管中。在水解管内加12mol／L盐酸10～15mL(视样品蛋白质含量而定)，含水量高的样品(如牛奶)可加入等体积的浓盐酸，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3-5rain，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(接近Opsi)，然后充人高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110-．112的恒温干燥箱内，水解6h后取出冷却。打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中．用6moI／L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸，冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中，用10mol／L、lmol／L氢氧化钠溶液调节pH为8+-0．2，过滤于50mL容量瓶中，用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀，反复三次，把洗液并入滤液中，以水洗至刻度，摇匀备用。 1．5分析测定 1．5．1标准曲线的绘制 吸取0．00、10．00、20．00、30．00、40．00mL，分别置于100mL容量瓶中，定容摇匀。浓度分别为0．0、0．5、1．0、1．5、2．0ug／mL。取不同浓度的上述溶液4．00mL，分别加入20mL具塞试管中，加氯胺T溶液2mL，摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL，摇匀，塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出，迅速冷却，在波长558+2nm处测定吸光值，绘制标准曲线。[3] 1．5．2试样测定 从待测液中吸取已制备好的样液4．00mL于20mL具塞试管中，以下按1．5．1步骤进行，同时作空白试验。 1．5-3分析结果的计算[4] 计算公式： 式中：X——样品中羟脯氨酸的含量，mg／g； c——从标准曲线上查得相应的羟脯氨酸量，g； m——称取试样的质量，g： V——样液体积，mL： A——稀释倍数。 1．5．4重复性的测定 取一个掺加质量分数3％水解动物胶原蛋白粉的燕窝，按1．5-2的方法平行测定10次羟脯氨酸的质量浓度，