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玻璃酸钠促进角膜上皮损伤愈合作用的机制研究 钱雪 赵荣贤 税庆华 梁虹 　　大量文献报道了玻璃酸钠(sodium hyaluronate，SH)具有促进角膜缺损的愈合作用。由于动物研究可从客观体征、病理切片和机制方面进行充分的探讨，避免了临床上不能对患者进行一些检测的局限性，因此文献报道的研究多以动物试验为主，临床研究不多。现将查询到的研究报道作一介绍。 1 SH对角膜损伤促愈合作用的药理和毒理学研究 1991年Nishida等对兔离体角膜进行的组织培养研究结果表明，含有SH的培养液可促进角膜上皮细胞层伸展的长度，且作用强度呈剂量依赖性，而同时受试的其他多糖包括软骨素、硫酸软骨素、硫酸角质素和硫酸类肝素均无该作用。研究还表明，SH的上述作用与纤连蛋白(fibronectin)以及表皮生长因子(EGF)的作用是相加的，纤连蛋白和EGF的抗血清不能改变SH的上述作用。结果证明SH促进角膜上皮伸展的机制不同于上述两种物质。 1990年Miyauchi等用兔角巩膜断面在含SH的培养液进行培养研究，通过测定角膜基质创面上的上皮伸展长度来评价SH对其伸展的影响。探讨了不同分子量及不同浓度SH的作用强度。结果显示SH具有明显的促进上皮伸展作用，并揭示在SH的有效浓度下，培养液中纤连蛋白的浓度明显降低。提示SH可能是通过降低纤连蛋白的释放或促进纤连蛋白在角膜的沉积来产生其对上皮伸展的促进作用。 Inoue等[1]研究了SH对角膜上皮细胞增生的作用，并与EGF和纤连蛋白做对比研究，以探讨SH促进角膜损伤愈合的作用机制。结果表明，在含HA培养液中培养的角膜组织的增生明显增强，EGF组的上皮细胞增生也比对照组增强，但纤连蛋白没有明显的促增生作用。结果提示，SH促进角膜上皮损伤的愈合作用与其促进细胞的增生有关。 　　1991年Sugiyama等用兔眼角膜缺损模型研究了SH滴眼液对角膜损伤的促愈合作用。角膜缺损模型采用手术、正庚醇和碘蒸汽诱导三种方式，给药组分为低剂量(0.10% SH)和高剂量(0.25% SH)两组，以生理盐水为对照。研究发现，对碘蒸汽导致的角膜缺损模型，两个给药剂量均没有明显的角膜损伤愈合作用。高剂量对其他两组动物模型，角膜的愈合率均明显高于对照组，但低剂量组只对手术方式的病理模型具有明显的促进作用。为探讨其中的差异原因，对角膜产生纤连蛋白的量进行了测定。结果显示，由手术和正庚醇导致的角膜损伤模型的角膜产生的纤连蛋白的量明显地高于碘蒸汽模型组，药物分布研究的结果显示SH在前两种模型角膜内的分布和存留也明显高于后者。因此认为，SH通过角膜产生大量的纤连蛋白或在角膜内大量存留的途径来加速角膜损伤的愈合。 Asari等[2]对正庚醇导致的兔角膜损伤模型自发愈合过程中角膜组织中SH含量及分布进行了研究，以探讨其作用机制。研究发现，损伤后角膜中的SH含量开始逐渐增高，直到损伤后24d，SH的含量开始逐渐降低，56d恢复至正常水平。角膜损伤后，上皮及基质的SH染色性明显增加，直到损伤后28d，角膜上皮恢复到正常水平后，上皮的SH染色性开始下降，而基质内的SH染色性依然强，直到损伤56d以后才开始减弱。同时，SH的受体——CD44和纤连蛋白在角膜上皮的染色性是与SH同步的。结果提示，SH、CD44 和纤连蛋白在角膜上皮损伤的愈合过程中共同发挥重要的作用。 Nakamura等[3]还探讨了SH与纤连蛋白联合对角膜损伤的作用。对化学灼伤后的角膜4h内先给予0.1%纤连蛋白滴眼液，随后改用0.1% SH滴眼液治疗32h，角膜的平均愈合率与用生理盐水替代纤连蛋白(即生理盐水联合SH治疗)对照组、单纯纤连蛋白滴眼液对照组相比明显高。结果证实，SH与纤连蛋白具有协同作用。 Nakamura等[4,5]对SH促进角膜损伤的机制进行的细胞培养表明，SH可明显促进角膜上皮细胞与纤连蛋白基质的黏附，但对上皮细胞与层黏蛋白(laminin)基质和Ⅳ型胶原基质的黏附没有促进作用。其他多糖如硫酸软骨素、硫酸类肝素和硫酸角质素等均没有此作用。特定结合区域的单克隆抗体的阻断试验结果揭示，SH与纤连蛋白的N端的纤维蛋白、肝素-结合区域结合，促进上皮细胞对纤连蛋白附着并由此加速上皮的愈合。组织培养的结果表明，SH、纤连蛋白和Ⅳ型胶原均能促进角膜上皮的伸展，而层黏蛋白没有作用。协同作用研究结果表明，SH与纤连蛋白以及Ⅳ型胶原具有协同作用。纤连蛋白的抗血清可部分阻断SH与纤连蛋白的协同作用，纤连蛋白受体的抗血清可完全阻断两者促进上皮伸展的协同作用。结果提示，预先经纤连蛋白处理后再用SH治疗可增强后者的促角膜上皮伸展作用。 Sakuma等[6]研究发现，兔角膜缺损经SH滴眼液治疗后，明胶酶MMP-9(92 kD)对角膜基质酶解活性增强，提示SH参与了兔角膜上皮愈合过程中M