第四章基本常用技术摘要.pptVIP

细胞冻存时，存在两种损伤：冰晶损伤 　　　　　　　　　　　　　溶质损伤 　 冰晶损伤：由于温度下降，细胞内外的水分都会结冰，所形成的冰晶会造成细胞膜和细胞器的破坏并引起细胞死亡。这种因细胞内、外结冰而致的细胞损伤被称为细胞的冰晶损伤。 冰晶损伤是由冷却速度过快造成，冷却速度越快，冰晶损伤越大。　　　 溶质损伤：因保存溶液溶质浓度增高而致的细胞损伤被称为溶质损伤。 细胞悬浮在溶液中，随着温度的下降，细胞外部的水分会先结冰，从而使得未结冰的溶液中电解质的浓度升高。如果将细胞暴露在这样高溶质的溶液中且时间过长，细胞膜上脂质会受到损坏，细胞便发生渗漏。 溶质损伤是由冷却速度过慢，使细胞在高浓度的溶液中暴露的时间过长而造成，冷却速度越慢，此损伤越严重。 如果在溶液中加入冷冻保护剂时，则可保护细胞免受溶质损伤和冰晶损伤。 保护机理： 冷冻保护剂易同溶液中水分子结合，从而降低冰点，减少冰晶的形成 ； 通过其摩尔浓度降低未结冰溶液中电解质的浓度，使细胞免受溶质的损伤，细胞得以在超低温条件下保存。 影响冷冻效果的因素有以下几点： 　1.冷冻速率 　当冷冻速度过慢时，细胞脱水严重，细胞体积严重收缩，超过一定程度时即失去活性。冷冻速度过慢，还会引起细胞外溶液部分结冰，从而使细胞外未结冰的溶液中溶质浓度增高，产生溶质损伤。 　当冷冻速度过快时，细胞内水分来不及外渗，会形成较大冰晶