碧波TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)(细胞样本专用)1.docVIP

碧波TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)（细胞样本专用） Cat Number： Specification： Store at: -20℃ for one year MADE BY BIOBOX 碧波TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)（细胞样本专用） 一、产品简介 TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤，即可在普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。 细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA ladder。基因组DNA断裂时，暴露的3’-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3-OH形成，很少能够被标记。这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。 本试剂盒适用于细胞样本（细胞涂片）的凋亡原位检测。 本试剂盒有如下优点： 高灵敏度：可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。 操作简便：使用Ready-to-Use型试剂，并配有DAB。 特异性：TUNEL检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。 快速：仅需约3个小时即可完成。 方便观察：使用光学显微镜观察实验结果，无需贵重设备。 二、试剂盒组份 组 份 Cat: BA2220 Cat: BA2250 Cat: BA22100 储存条件 平衡液 1.0 mL 2.5 mL 5.0 mL -20℃ TdT酶 80μL 200μL 400μL -20℃ Streptavidin-HRP 10μL 25μL 50μL 4℃避光 Biotin-dUTP 20μL 50μL 100μL -20℃避光 DAB 2mg 5mg 10 mg -20℃避光 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 多聚甲醛、甲醇、乙醇、PBS、H2O2 、TritonX-100、柠檬酸钠、复染染液：苏木素或甲基绿等； 盖玻片、载玻片、染色缸、染色湿盒、光学显微镜、37℃孵箱、移液器等。 四、保存条件： -20℃保存，Streptavidin-HRP和DAB需避光保存。 五、注意事项： 1、TUNEL法特异性检测细胞凋亡时产生的DNA断裂，但不会检测出射线等诱导的DNA断裂(和细胞凋亡时的断裂方式不同)。这样一方面可以把凋亡和坏死区分开，另一方面也不会把射线等诱导发生DNA断裂的 非凋亡细胞判断为凋亡细胞。 2、极少数细胞凋亡时没有DNA断裂，此时不适用TUNEL法检测。在个别类型的坏死细胞中也发现TUNEL检测呈阳性。在需要严格判断细胞凋亡的情况下，最好同时检测多个凋亡指标。 3、使用前请认真阅读本说明书，提前准备好相关试剂。 4、因本试剂盒中组分均为微量，使用前请离心。 5、为避免试验误差、降低试剂的损耗，建议使用精密度高的进口微量移液枪及枪头。 6、 TdT 酶反应液最好在使用前根椐样本数量集中配制，再分别滴加于各样本片上，避免每个样本单独配制而产生的试剂损耗。 7、DAB为固体粉末，使用前加入PBS配制成20×DAB（10 mg/ml） 操作规程 检测样本的预处理 TUNEL检测时样本的预处理是试验的关键所在，本说明书推荐的条件仅为普遍情况，用户需根椐自已的样 本材料及首次试验结果来调整各个条件，如处理时间、处理浓度等，来优化出适合自身样本的试验条件，从而做出客观的试验结果。 对于细胞样本 把准备好的细胞涂片或爬片自然晾干。 把晾干的样本浸入固定液，室温（15-25℃）固定15-60min。 （固定液的配制：4%多聚甲醛溶于PH7.4的PBS中，需新鲜配制） 把固定好的样本浸入PBS漂洗3次，每次5min。 把c步处理好的样本浸入封闭液中，室温（15-25℃）封闭10min。 （封闭液的配制： 3%H2O2溶于无水甲醇） 把d步处