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深圳技师学院应用生物系 《抗生素抗生素 班 级： 10生物J4 指 导 教 师： 任茜 莫全毅 二零一三年五月二十日 目 录 一、摘 要 3 二、原理 3 三、品名，氯霉素滴眼液 3 四、试验方法 4 五、后记 6 抗生素 关键词：抗生素；稀释法；管碟法；抗菌效价 (2) 目的：根据抗菌药物对液体培养基中试验菌的生长繁殖抑制作用的程度，将能够抑制细菌生长的最低浓度作为衡量指标。MIC值愈小，抑菌作用愈强。 二、原理 当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。（根据抗菌药物对液体培养基中试验菌的生长繁殖抑制作用的程度，将能够抑制细菌生长的最低浓度作为衡量指标。MIC值愈小，抑菌作用愈强。） 三、品名，氯霉素滴眼液 主要成分含主要成份氯霉素20毫克，辅料为硼酸、硼沙、氯化钠、防腐剂药品类别该品为五官科用药类处方药药品氯霉素滴眼液,为广谱抗生素，同样属于处方药性状该品为微黄色或几乎无色的澄明液体。用法用量外用滴眼，滴于眼睑内，一次1～2滴，一日3～5次。执行标准中国药典2010年版二部 规格8ml：20mg 四、试验方法 Micrococcus luteus ） 培养基：营养肉汤培养基，营养琼脂培养基，抗生素效价2号培养基，0.9％Micrococcus luteus ）冻干粉一支自然解冻，准备一瓶灭菌好的营养肉汤100ml，无菌操作，（37℃,24h）摇床培养。 （2）琼脂斜面：取复苏好的藤黄微球菌（Micrococcus luteus ）用接种环顶点沾一下在灭菌好的斜面划线（37℃,24h）培养即可。 （3）菌液制备：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h即可，4℃保存。 （4）找到藤黄微球菌适合的梯度：从上面斜面的培养物中（用接种环顶点沾一下即可）接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养18h，用直径3mm的接种环取一环菌液接种于5ml肉汤培养基中，经37℃培养6h取出，在无菌操作下，用生理盐水稀释至，取，，10-5做细菌总数计数。 稀释梯度至10-5，细菌总数计数表 1 无法计数 86 19 2 无法计数 74 23 平均菌落数 无法计数 80 21 结论：由稀释梯度至，细菌总数计数表可知，10-5为我们所需要的梯度。 1.试管法（无菌操作） 2.药物稀释法 （1）预实验：取3号培养基100ml，试管10支，第一管加药物1ml+9ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三管取第二管5ml+5ml肉汤第四管取第三管5ml+5ml肉汤混匀，以此类推至第6管，取出5ml弃去，第七管不加药，只加了营养肉汤5ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，10-6，及阴性。 （2）对照品：取3号培养基100ml，试管10支，第一管加对照品1ml+7ml肉汤充分混合，第二管取第一管中1ml+9ml肉汤混匀，第三管取第二管5ml+5ml肉汤第四管取第三管5ml+5ml肉汤混匀，以此类推至第六管，取出5ml弃去，第七管不加药，只加了营养肉汤5ml。稀释完毕后，十管的药物稀释度为，，…，10-6，及阴性。 （3）菌液制备：从上述的菌液中取1ml用生理盐水作为稀释剂梯度稀释至10-5，用灭过菌的移液枪每管加0.1ml，第七管不加菌作为阴性对照，第八管不加药物加菌为阳性对照。加完菌后充分混匀，经37℃培养18h后判断结果。 药物稀释法找出最大抗菌效价表，加菌量为0.1ml 稀释 倍数 1:100 1:200 1:400 1:800 1:1600 阴性 阳性 样品 － － － ＋ ＋ － ＋ 对照 － － － ＋ ＋ － ＋ 抗菌效价（u） 25 12.5 6.25 3.12 1.06 / / 备注：“－＋:600 1：700 阳性 阴性 样品 ＋ ＋ ＋ ＋ - 标准品 ＋ ＋ ＋ ＋ - 抗菌效价（u） 5 4 3.2 / / 备注：“－＋＋ 2.81cm ＋ 2.10 cm ＋ 0.93 cm － 0 cm － 0 cm ＋ 2