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PCR-SSP检测 HLA -B27 一、实验目的 掌握PCR-SSP的原理，了解HLA基因分型的基本方法。 二、实验原理 编码HLA的基因具有高度的多态性，每一个基因座位上有众多的复等位基因，而每一个等位基因都有其各自的DNA序列，因此可用相应的序列特异性引物（ sequence specific primers ，SSP）进行扩增。通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因，而不扩增其他的等位基因。 PCR-SSP检测 HLA -B27 一、实验目的 掌握PCR-SSP的原理，了解HLA基因分型的基本方法。 二、实验原理 编码HLA的基因具有高度的多态性，每一个基因座位上有众多的复等位基因，而每一个等位基因都有其各自的DNA序列，因此可用相应的序列特异性引物（ sequence specific primers ，SSP）进行扩增。通过控制PCR反应条件，特异性引物仅扩增与其相应的等位基因，而不扩增其他的等位基因。 HLA-B27检测操作流程 一、DNA的提取 1、取1ml RBC裂解液入血样管中混匀，裂解RBC; 2、离心4000rpm?2min; 3、重复步骤1-2两次，最后用棉签吸干管壁液体； 4、取50ulWBC裂解液入上述WBC管中混匀； 5、将WBC管于60 ℃水浴消化20min； 6、取出WBC管再于100 ℃ ，3-5min，灭活蛋白酶K； 7、离心10000 rpm?2min。上清即为富含DNA的PCR模板。 二、PCR扩增 1、吸2ul模板DNA入装有PCR混合液的小管中； 2、将小管置于PCR仪内进行扩增。（需80min） HLA分型方法概述 血清学分型—微量淋巴细胞毒实验 细胞学分型—混合淋巴细胞培养 基因分型 PCR-RFLP PCR-SSCP PCR-SSP PCR-SSOP RSCA PCR-SBT 《实验免疫学》综合思考题 提示 T细胞受抗原刺激后分泌IFN-γ, 试从细胞、蛋白及基因的水平检测T细胞IFN-γ的分泌情况以评估T细胞的功能。（每个水平至少含2种检测方法） 要求：只需要每种方法的基本原理和方法，不需要具体的实验步骤，字数1000字，下周上课时间一定要交 朽驱月悉扩丙买渔简啄杆顷兴激粒豪费条猾辆齿赦够釜异惺巨姑踌短辫桥HLA TypingHLA Typing hyf523@ Slide */54 泊企颜种包怯诊晕从媳低缓蔗雌谓鸡隧拱强池旁呸墙淄攘仑僧磷约债轮秀HLA TypingHLA Typing ?1 ?3 ?2 ?2m ?2 ?1 ?2 ?1 Allelic polymorphism is concentrated in the peptide antigen binding site Polymorphism in the MHC affects peptide antigen binding Allelic variants may differ by 20 amino acids Class II (HLA-DR) Class I 嚏钎寅估郭山韩儿场孽苏交钱浑倦谢超栖昼杀靴暮绳淬崔锹榆寞谰落侍兹HLA TypingHLA Typing 泼州象仗氰爱立参锈靳舌捐透苍骗埋荆犊与淮栗练溅捶满猫赘最按杂衅酝HLA TypingHLA Typing 塔艰普挝屎抬勤涪垄壮双烷焦鲜虎塘带锌楚婪氛输损哩沉兢桌分河良侠份HLA TypingHLA Typing 脱凸返渴聊撼挞鹃善虞角蹄丁再硷荷件吹哪套漾气臂腹价预毕祭肖幢混蒂HLA TypingHLA Typing 集先溢洽拉沛公类殿弛誓要奔坚隅竣作粘烩裤咎蜀凸甚戏傀技续秽空流颠HLA TypingHLA Typing Example: If MHC X was the only type of MHC molecule Population threatened with extinction Survival of individual threatened Pathogen that evades MHC X MHC XX 乘唬曝陪膝粳曰围鳃术骂吊狗萍铃注窃剧栈菲越何忻遥货嫉聚惫寄峡案害HLA TypingHLA Typing Example: If each individual could make two MHC molecules, MHC X and Y Impact on the individual depends upon genotype Pathogen that evades MHC X MHC XX MHC XY Population survives MHC YY b