VP2蛋白感染率分子流行病学论文.doc

VP2蛋白感染率分子流行病学论文 【提示】本文仅提供摘要、关键词、篇名、目录等题录内容。为中国学术资源库知识代理，不涉版权。作者如有疑义，请联系版权单位或学校。 【摘要】水貂阿留申病(Aleutian mink disease, AMD)是由水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease parvovirus, AMDV)引起的水貂慢性传染性疾病,主要侵害水貂的免疫系统,以浆细胞弥漫性增生和持续性病毒血症为特征。AMD在有水貂饲养的国家普遍存在,临床上主要表现为水貂产仔量降低、死胎、流产、肾小球肾炎、动脉血管炎和肝炎,并导致成年水貂的免疫系统紊乱,仔貂突发严重肺炎而死亡。病理剖检常见肾肿大、充血而呈红色,后变灰褐色或淡黄褐色,有的表面可见斑点状出血,间有灰白色坏死灶。AMD的发病率和死亡率都很高,同时病貂毛皮质量下降,对水貂养殖业造成巨大的经济损失。近年国际毛皮市场的旺盛需求带动了我国的水貂养殖规模,管理上的不完善等原因导致我国AMDV感染率居高不下。为准确掌握我国近年来AMD的流行现状,本实验于2009-2011年于水貂打皮期间从我国黑龙江、吉林、辽宁、山东等四个水貂主要养殖地区的9个水貂养殖场采集上千份水貂肾脏,2009-2010年,从我国3个独立的貂场共收集18654份水貂血清样本。分别应用聚合酶链式反应(PCR)对和流免疫电泳(CIEP)方法对收集样本进行AMDV(?)感染率调查,结果显示总体阳性率分别为为94.59%和68.67%,表明我国水貂养殖业的AMDV感染率仍然居高不下。目前国内外尚未研制出有效预防AMD的疫苗,仍只能通过检疫淘汰病貂来实现对本病的控制和根除,对流免疫电泳(CIEP)是现今世界公认的并且应用最为广泛的检测方法。为验证AMDV在我国的遗传演化情况,以研究AMD的诊断抗原,将疑似AMDV感染致死的送检水貂经PCR初步诊断,应用猫肾传代细胞系(CRFK)分离培养。细胞培养物提取DNA,用PCR检测呈阳性后,对分离前后AMDV的VP2基因全序列进行克隆测序。结果与GenBank上传的其它AMDV亚型VP2序列进行比较后证明我们获得一株可以在CRFK细胞中稳定生长的AMDV毒株(命名为ADV-ZYL1),为今后AMDV的细胞抗原的制备奠定了基础。为研究我国AMDVVP2序列的分子流行病学,对四个地区选取的9株代表样本中AMDV的VP2全序列进行测定后与GenBank上10株国际流行AMDV毒株进行序列对比,发现19株AMDV的647氨基酸序列中105个氨基酸位点存在突变,其中27个突变点仅存在于中国的AMDV毒株,这些位点不仅分布于高变区,还发生在免疫反应区(VP2：429-524)。突变位点同时包含了决定AMDV宿主范围、感染稳定性等功能的位点,另外还发现我国的两个毒株ADV-8D1和ADV-DL1在高变区的235位点缺少一个氨基酸,是三个核苷酸的同时缺失导致,由于不是偶然现象,因此这种突变有可能已经能够进行稳定遗传,进一步的研究VP2氨基酸突变位点对AMDV的防治可起到推动作用。使用MEGA4软件对19株AMDV建立进化树进行分析,结果表明同一貂场有可能存在多种基因型的AMDV同时传播,毒株的亲缘关系与分离时间和地点的关系不大。19株AMDV按照亲缘关系被分在了进化树的五个分支,其中50%自我国分离的AMDV毒株处在进化树的C组和D组,而且这两组不包含任何可检索到的国外毒株,余下50%毒株则和其他国家分离的毒株存在较近的亲缘关系,说明国外的一些毒株在我国貂场中仍普遍流行存在,而我国的某些毒株形成了独立的进化支并在不同地区貂场中流行。一方面我国目前AMDV的流行趋势复杂,貂场内我国毒株和国外毒株的进化株同时存在,对我们水貂养殖业AMDV的净化造成了不便。另一方面,AMDV的核苷酸和氨基酸的突变率都很高,随着AMDV在国内饲养过程中基因的不断突变,使用进口抗原进行AMD检测有可能会影响检测的特异性和敏感性,降低AMD的净化效果,同时进化树显示国内的大部分AMDV毒株处于相同或相近的进化树,有一定的进化规律和共同的进化趋势,为选择代表毒株制备适用于我国毒株的标准CIEP抗原提供了理论依据。 【关键词】水貂阿留申病毒；VP2蛋白；感染率；分子流行病学； 【篇名】水貂阿留申病流行病学调查 【目录】水貂阿留申病流行病学调查 摘要 4-6 Abstract 6-7 1 绪论 11-22 1.1 课题背景 11-12 1.2 文献综述 12-21 1.2.1 水貂阿留申病概述 12-14 1.2.2 水貂阿留申病病毒概述 14-21 1.3 本课题的来源及主要内容 21-22 2 我国主要水貂养殖地区阿留申病检验及感染状况调查 22-30 2.1 材料 22 2.1.1 实验样本 22 2.1.2